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专利号: 2014102499067
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.重组表达载体pMA5-choM1和pMA5-choM2,其特征是:通过PCR技术获得来源于新金色分枝杆菌的choM1和choM2基因,分别与表达载体pMA5连接构建获得。

2.重组枯草芽孢杆菌,其特征是:将权利要求1中所述的重组载体pMA5-choM1和pMA5-choM2,用化学转化法分别转化菌株Bacillus subtilis168,获得重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(pMA5-choM1)和Bacillus subtilis(pMA5-choM2),重组枯草芽孢杆菌ChoM酶活较基因来源菌有较大的提高。

3.将权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌全细胞转化胆固醇产胆甾-4-烯-3-酮的方法,其特征是:将该菌株以1%接种量接种于100mL LB培养基中,培养24h,离心回收菌体,洗涤两次,用适当的50mM的Tris-HCl pH7.0缓冲液重新悬浮,加入0.1%(w/v)胆固醇和

0.1%(v/v)Tween-80,在37℃,160rpm培养24h。最终底物摩尔转化率达到67%和83%,比原始菌提高了约20和25倍。