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专利号: 2014102717216
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精葡萄糖基转移酶,以Genbank AF047363.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶基因为出发序列,其特征在于,Genbank AF047363.1所示基因编码的环糊精葡萄糖基转移酶的第265位的谷氨酰胺突变成赖氨酸Q265K。

2.一种获得权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶的方法,其特征在于以Genbank AF047363.1公布的基因为出发基因,将该基因编码的环糊精葡萄糖基转移酶的第265位的谷氨酰胺突变成赖氨酸Q265K。

3.产权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶的基因工程菌或转基因细胞系。

4.权利要求3所述产环糊精葡萄糖基转移酶基因工程菌的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)采用化学全合成或PCR方法克隆编码权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶基因;

2)将步骤1)获得的环糊精葡萄糖基转移酶基因连接到大肠杆菌表达载体,得到重组表达载体;

3)将步骤2)获得的重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)得到基因工程菌。

5.权利要求4所述的基因工程菌的构建方法,其特征在于所述表达载体为pET-20b(+)。

6.应用权利要求3所述基因工程菌发酵生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法,其特征在于以产环糊精葡萄糖基转移酶的基因工程菌为生产菌株,活化后按4%接种量将种子发酵液接到含100μg/mL氨苄青霉素的TB液体培养基;大肠杆菌在30℃摇床培养至OD600=0.6,加入0.01mM终浓度的IPTG诱导胞外表达,并在25℃摇床继续培养发酵90h后,将发酵液于4℃、10000rpm离心20min除菌体,收集富含环糊精葡萄糖基转移酶的上清液。