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专利号: 2014102724313
申请人: 青岛科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种信号放大技术电化学传感器检测DNA的方法,包括以下步骤:

(1)电化学探针制备方法其特征在于:

(a)取2mL的离心管,加入2~30μL DNA1和2~30μL pH8.2的50mM的Tris-HCl缓冲溶液和10μL TCEP反应1h,用以活化巯基;然后,另取2mL离心管依次加入1mL金-铂纳米粒子和100~2000μL硫堇溶液反应0.5h,使硫堇吸附在金-铂纳米粒子上;

(b)将吸附了硫堇的金-铂纳米粒子加入到活化好的巯基DNA1中,放入摇床轻摇反应

16h,使巯基DNA1与金-铂纳米粒子连接起来;最后在15000转速下,离心30min,得到红色沉淀,并用10mM,pH8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次,分散在1mL10mM的pH8.0的磷酸缓冲溶液中得到DNA1/Th/Au@PtNPs电化学探针;

(2)金电极的预处理:金电极经0.2μm,0.03μm,0.05μm的α-A12O3抛光粉抛光后,用二次蒸馏水冲洗干净,并在超声波水浴中超声5min,用高纯氮气吹干备用;

(3)金纳米粒子修饰金电极制备:首先取2~30μL AuNPs溶液滴涂在金电极表面,得金纳米粒子修饰金电极(AuNPs/GE),置于避光处自然晾干;

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(4)发卡DNA的预处理:取一定量的1.0×10 M~1.0×10 M的巯基DNA4(或DNA3)于2mL离心管中,置于95℃恒温水浴槽中加热5min,取出后立即置于冰水中冷却1min即得到发卡DNA;

(5)电化学传感器的制备:取2~30μL上述预处理后的发卡DNA3滴涂在AuNPs/GE表-4面,4℃自组装24h;接着取10μL10 M的巯基乙醇滴于电极表面,反应30min,然后用10mM的磷酸缓冲溶液冲洗两次,即得电化学传感器;

(6)标准曲线的绘制:取一组浓度梯度的目标DNA2,分别滴加到电化学传感器上,37℃下孵育2h后,取10μL发卡DNA4滴加到电极表面,37℃下孵育4h,然后用10mM,pH8.0的磷酸缓冲溶液冲洗两次;最后,取10μL制备的电化学探针滴加到电极表面,继续孵育1h;

然后利用循环伏安法或DPV测得电流强度,根据目标物浓度与电流强度的关系作图得标准曲线,并根据标准曲线计算线性回归方程;

(7)样品测定:将含目标DNA2的样品滴加到电化学传感器上,37℃下孵育2h后,取

10μL发卡DNA4滴加到电极表面,37℃下孵育4h,然后用10mM,pH8.0的磷酸缓冲溶液冲洗两次;最后,取10μL制备的电化学探针滴加到电极表面,继续孵育1h;然后利用循环伏安法或DPV测得电流强度,根据电流强度,再利用线性回归方程计算样品中目标DNA2含量。

2.根据权利要求1的测定目标DNA的方法,其特征在于所述的DNA序列如下:所述的DNA1的部分序列为:5`-TTT TTT ATT CGA TCC GGT GCT CTT ATGCCC-HS-3`;

所述的DNA2的部分序列为:5’-CAA TAA CTA CCG GGC ATT ACT GGC CTT-3’;

所述的DNA3的部分序列为:5’-SH-C6-AAA GCC AGT AAT GCC CGG TAG TTA TTCCAT CGT GTA CAA TA A CTA CCG GGC ATA AGA GCA CCC TTG TAC-3’;

所述的DNA4的部分序列为:5’-TAG TTA TTG TAC ACG ATG GAA TAA CTA CCG GGCATC CAT CGT GTA C-3’;

3.根据权利要求1所述的电化学传感器在检测DNA含量中的应用。