1.一种多菌灵完全抗原的合成方法,其特征在于步骤如下:
(1)前体261的合成:将氨基己酸甲酯盐酸盐与等摩尔量的2-氯苯并咪唑混合,于二异丙基乙基胺中微波150℃过夜反应13h,得到产物,经纯化,即得到前体261,产率为10%;
(2)多菌灵半抗原H1的合成:将步骤(1)制备的前体261溶于四氢呋喃中,室温搅拌反应过夜,60℃旋蒸除去四氢呋喃,以1mol/L的HCl溶液调节pH 至6~7,制备色谱纯化得多菌灵半抗原H1;
(3)多菌灵完全抗原的制备:将多菌灵半抗原H1与载体蛋白上的氨基进行偶联,即得到多菌灵完全抗原。
2.根据权利要求1所述多菌灵完全抗原的合成方法,其特征在于步骤(1)所述的氨基己酸甲酯盐酸盐由氨基己酸和氯化亚砜在甲醇中回流制得。
3.根据权利要求1所述多菌灵完全抗原的合成方法,其特征在于:步骤(2)所述多菌灵半抗原H1,其结构简式如下所示:H1。
4.根据权利要求1所述多菌灵完全抗原的合成方法,其特征在于:步骤(3)所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HSA中的一种。
5.根据权利要求1所述多菌灵完全抗原的合成方法,其特征在于步骤(3)多菌灵完全抗原的制备具体步骤为:
1)半抗原H1溶液的活化:取多菌灵半抗原H1 35mg,加入2mL DMF溶解,再分别加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDC,其中多菌灵半抗原H1:NHS:EDC的摩尔比为1:1.5:2,室温搅拌反应12h,即得活化的半抗原H1溶液;
2)蛋白溶液的制备:取160mg载体蛋白,再加入10mL 0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液,即得蛋白溶液;
3)反应:将步骤1)制备的活化的半抗原H1溶液慢速滴加到步骤2)制备的蛋白溶液中,室温下反应8h;用PBS缓冲液透析3天,期间换水6次,即得到多菌灵完全抗原。
6.用权利要求5所述方法制备的多菌灵完全抗原的应用,其特征在于:采用多菌灵半抗原H1制备的完全抗原免疫动物得到多克隆抗体或单克隆抗体,并应用于快速检测食品中的多菌灵残留。