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专利号: 2014103070171
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于纳米金等离子激元的直接竞争酶免疫分析方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)将小分子化合物的抗体溶于包被缓冲液内,并施加到固相载体上,在37℃孵育,再以封闭液封闭,从而将小分子化合物抗体包被在固相载体上;

(2)将过氧化氢酶标记的半抗原和可能含有小分子化合物的测试样品于磷酸盐缓冲液中混合,施加到经步骤(1)处理后的所述固相载体上,于37℃孵育,使所述测试样品中可能含有的小分子化合物和过氧化氢酶标记的半抗原与包被在固相载体上的小分子化合物抗体竞争性结合,之后洗涤,从而移除未与所述小分子化合物抗体结合的小分子化合物及过氧化氢酶标记的半抗原;

(3)在经步骤(2)处理后的所述固相载体上施加过氧化氢溶液;

(4)向经步骤(3)处理后的所述固相载体上施加5mM氯金酸溶液、2mM柠檬酸钠溶液和

2mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液,在室温下充分反应后,再通过检测混合反应体系的可见光吸收强度,实现对测试样品中所含小分子化合物的定量检测,所述可见光的波长为540nm,其中由过氧化氢溶液、5mM氯金酸溶液、2mM柠檬酸钠溶液以及2mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液混合形成的显色液还作为选定缓冲体系,在该选定缓冲体系中,结合于所述小分子化合物抗体上的所述过氧化氢酶标记的半抗原能够分解过氧化氢,并且过氧化氢能够还原所述氯金酸形成纳米金粒子。

2.根据权利要求1所述基于纳米金等离子激元的直接竞争酶免疫分析方法,其特征在于还包括:

a、取不同浓度的小分子化合物标准样品分别与固定用量的过氧化氢酶标记的半抗原混合后,与包被在固相载体上的小分子化合物抗体竞争性结合,移除未与所述小分子化合物抗体结合的小分子化合物及过氧化氢酶标记的半抗原,并加入过氧化氢、氯金酸及用以形成选定缓冲体系的辅助试剂,再检测每一小分子化合物标准样品最终所形成的混合反应体系的对于可见光的光吸收强度,进而依据所述小分子化合物标准样品的浓度与最终所获的相应混合反应体系的可见光吸收强度之间的对应关系建立标准曲线;

b、将待测试样品与过氧化氢酶标记的半抗原混合后,与包被在固相载体上的小分子化合物抗体竞争性结合,移除未与所述小分子化合物抗体结合的过氧化氢酶标记的半抗原及可能存在的小分子化合物,并加入过氧化氢、氯金酸及用以形成选定缓冲体系的辅助试剂,再检测最终所形成的混合反应体系的可见光吸收强度,并与所述标准曲线比对,进而定量测得待测试样品中所含小分子化合物的浓度。

3.根据权利要求1或2所述基于纳米金等离子激元的直接竞争酶免疫分析方法,其特征在于所述小分子化合物包括甲基睾酮、克伦特罗或庆大霉素。