1.一种冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶A,其特征在于所述3-异丙基苹果酸脱氢酶A的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.如权利要求1所述的冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶A在生物催化3-异丙基苹果酸制备4-甲基-2-氧代戊酸中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:以含冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶A重组工程菌经诱导培养获得的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮,超声破碎后,将破碎混合液离心,取上清液为催化剂,以3-异丙基苹果酸水溶液为底物,以辅酶Ⅰ为辅助底物,于Tris-HCl缓冲液中,37℃、150rpm条件下反应,反应结束后,将反应液离心,取上清液即获得含4-甲基-2-氧代戊酸的混合液,将混合液分离纯化,获得4-甲基-2-氧代戊酸。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述底物3-异丙基苹果酸水溶液的浓度为
0.1M,所述底物的初始浓度为0.02M,所述催化剂的体积用量以超声破碎前湿菌体质量计为
0.01g/L,所述辅酶Ⅰ的终浓度为10g/L。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含3-异丙基苹果酸脱氢酶A的重组工程菌接种于含终浓度50μg/ml的Kan抗性的LB液体培养基中,
37℃、250r/min培养过夜,取培养物按体积浓度2%的接种量转接于含有终浓度50μg/ml Kan抗性的LB液体培养基中,37℃、250r/min培养至菌体浓度OD600为0.6~0.8,向培养物中加入终浓度0.05mmol/L的IPTG诱导培养8h,收集湿菌体,将湿菌体在功率40%、破1s停1s条件下超声破碎,取细胞破碎混合液离心,取上清液即为催化剂。
6.一种编码权利要求1所述3-异丙基苹果酸脱氢酶A的基因。
7.如权利要求6所述的编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列如SEQID No.2所示。
8.如权利要求6或7所述的编码基因在构建能够生物催化3-异丙基苹果酸制备4-甲基-2-氧代戊酸的基因工程菌中的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述的应用为:构建含有所述3-异丙基苹果酸脱氢酶A基因的重组载体,将所述重组载体转化至大肠杆菌中,获得的重组基因工程菌进行诱导培养,培养液分离纯化,获得含有3-异丙基苹果酸脱氢酶A基因的菌体细胞。