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专利号: 2014103075743
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种冬虫夏草中国被毛孢几丁质酶F,其特征在于所述几丁质酶F的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的几丁质酶F在生物催化胶体几丁质生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:将含几丁质酶F重组工程菌经诱导培养后的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮,超声破碎,离心,取上清液作为催化剂,以胶体几丁质溶液为底物,于pH值为4.6的醋酸缓冲液中,37℃下反应,反应结束后,将反应液离心,取上清液,获得含N-乙酰-D-氨基葡萄糖的混合液;

所述胶体几丁质溶液按如下方法制备:将几丁质粉末加入丙酮中研磨至糊状,在10℃下边研磨边慢慢加入浓盐酸,用滤纸过滤,然后将滤液缓缓加入到剧烈搅拌的体积浓度

50%乙醇水溶液中,析出沉淀,离心去上清液,收集胶体几丁质,用蒸馏水a冲洗数次至中性,混悬于蒸馏水b中即为胶体几丁质溶液;所述浓盐酸的体积用量以几丁质粉末质量几为40mL/g,所述蒸馏水b的体积用量以几丁质粉末质量几为100mL/g。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述底物的体积用量以几丁质粉质量计,终浓度为3.33mg/L;所述催化剂的用量以超声破碎前湿菌体的质量计,终浓度为8.2g/L。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含几丁质酶F的重组工程菌接种于含终浓度50μg/ml的Kan抗性的LB液体培养基中,37℃、250r/min培养过夜,取培养物,以体积浓度2%的接种量转接于50mL含有50μg/ml Kan抗性的LB液体培养基中,37℃、250r/min培养至菌体浓度OD600为0.6~0.8,向培养物中加入终浓度

0.05mmol/L的IPTG诱导培养8h,收集湿菌体,将湿菌体在功率40%、破1s停1s条件下超声破碎,离心,取上清液即为催化剂。

6.一种编码权利要求1所述几丁质酶F的基因。

7.如权利要求6所述的编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

8.如权利要求6或7所述的编码基因在构建能够生物催化胶体状几丁质生成N-乙酰-D-氨基葡萄糖的基因工程菌中的应用。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述的应用为:构建含有所述几丁质酶F基因的重组载体,将所述重组载体转化至大肠杆菌中,获得的重组基因工程菌进行诱导培养,培养液分离纯化获得含有几丁质酶F基因的菌体细胞。