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专利号: 2014103085980
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种冬虫夏草酯酶/脂肪酶,其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述冬虫夏草酯酶/脂肪酶在制备(S)-3-氰基-5-甲基己酸中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:以含冬虫夏草酯酶/脂肪酶重组基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-28a/Lip8经诱导培养后的湿菌体或湿菌体经超声破碎后离心得到的上清液进行Ni-NTA柱分离后获得的酯酶/脂肪酶为催化剂,以3-氰基-5-甲基己酸乙酯为底物,于pH为5~10的缓冲溶液中,在20~65℃、150rpm条件下进行转化反应,反应结束后,获得的转化液即为含有(S)-3-氰基-5-甲基己酸的混合液,将混合液分离纯化,得到(S)-3-氰基-5-甲基己酸。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含酯酶/脂肪酶基因的基因工程菌接种至含终浓度50μg/ml卡那霉素抗性的LB液体培养基中,37℃,

250rpm培养过夜,获得培养液,再将培养液以体积浓度2%接种量接种到新鲜的含有终浓度50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中,37℃,250rpm培养至菌体浓度OD600为0.4~

0.8,向培养物中加入终浓度为0.05mmol/L的IPTG,于16~28℃诱导培养8~12h后,离心,弃上清,收集沉淀,即获得含有酯酶/脂肪酶的湿菌体;湿菌体超声破碎后离心,上清液经Ni-NTA柱亲和层析分离纯化,即获得酯酶/脂肪酶。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述底物的初始浓度为10~200mM,所述催化剂为含酯酶/脂肪酶的湿菌体时,湿菌体的用量为10~30g/L,若催化剂为酯酶/脂肪酶时,酯酶/脂肪酶的质量用量为0.1~1mg/L。

6.一种编码权利要求1所述酶的基因。

7.如权利要求6所述基因,其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。

8.如权利要求6~7之一所述基因在构建能够生物催化3-氰基-5-甲基己酸乙酯的基因工程菌中的应用。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述的应用为:构建含有所述酯酶/脂肪酶基因的重组载体pET-28a/Lip8,将所述重组载体转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,获得的重组基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-28a/Lip8进行诱导培养,培养液分离纯化获得含有酯酶/脂肪酶的菌体细胞。