1.壶菌的LAMP快速检测方法,包括下述步骤:
(1)、提取待测样本总DNA作为反应模板;
(2)、按溶液1∶溶液2∶溶液3=1∶1∶3的体积比配置LAMP反应溶液;
(3)、将步骤(1)提取的样本总DNA加入到步骤(2)配制的LAMP反应溶液中,混合;
(4)、在62℃恒温水浴中反应30分钟;
(5)、诊断结果:将步骤(4)扩增反应后产物用电泳检测或荧光染料技术进行鉴定,呈阳性的表示样本含有壶菌,呈阴性的表示样本不含有壶菌。
2.根据权利要求1所述的壶菌LAMP快速检测方法,其特征在于,步骤(2)中的溶液
1为2×反应缓冲液,所述2×反应缓冲液由900μL2×LAMP反应缓冲液和100μL浓度为25mM的dNTP混合液组成;其中2×LAMP反应缓冲液的组成为:1M pH8.8Tris-HCl40mL,KCl1.49g,MgSO41.93g,(NH4)2SO42.64g,Tween20 2mL和Betaine187.4g;其中100μL的dNTP混合液由25μL dATP、25μL dCTP、25μL dGTP和25μLdTTP组成;
溶液2为引物混合物,所述引物混合物由20μL FIP、20μL BIP、2.5μL F3和2.5μL B3组成,其中FIP、BIP、F3和B3的浓度均为100μM;
溶液3为超纯水。
3.根据权利要求1所述的壶菌LAMP快速检测方法,其特征在于,步骤(3)中样本总DNA与LAMP反应溶液之间的体积比为1∶25。
4.根据权利要求1所述的壶菌LAMP快速检测方法,其特征在于,步骤(5)中电泳检测的过程为:取产物5μL进行2.0%核酸琼脂糖凝胶电泳,电泳条件为90V,25min;电泳图出现条带的为阳性,没有出现条带的为阴性。
5.根据权利要求1所述的壶菌LAMP快速检测方法,其特征在于,步骤(5)中的荧光染料技术鉴定过程为:在步骤(2)配置的LAMP反应溶液中加入染色剂,反应后在紫外灯下呈现绿色为阳性,不呈现绿色的为阴性。
6.根据权利要求5所述的壶菌LAMP快速检测方法,其特征在于:染色剂与步骤(2)配置的LAMP反应溶液的体积比为1∶25。
7.用于权利要求1~5中任一权利要求所述的壶菌的LAMP快速检测方法的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒由溶液1、溶液2和溶液3组成,其中溶液1、溶液2和溶液3之间的体积比为1∶1∶3;
溶液1为2×反应缓冲液,所述2×反应缓冲液由900μL2×LAMP反应缓冲液和100μL浓度为25mM的dNTP混合液组成;其中2×LAMP反应缓冲液的组成为:
1M pH8.8Tris-HCl40mL,KCl1.49g,MgSO41.93g,(NH4)2SO42.64g,Tween20 2mL 和Betaine187.4g;其中100μL的dNTP混合液由25μL dATP、25μL dCTP、25μL dGTP和
25μL dTTP组成;
溶液2为引物混合物,所述引物混合物由20μL FIP、20μL BIP、2.5μL F3和2.5μL B3组成,其中FIP、BIP、F3和B3的浓度均为100μM;
溶液3为超纯水。