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专利号: 2014103255515
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法,其特征在于,包括如下步骤,(1)将新鲜成熟的山茱萸果实在开水中浸泡数分钟后,流水冲洗冷却,剥除果核;将剩余的果肉干燥后粉碎,过40目筛,得到山茱萸粗粉;

(2)称取一定量的山茱萸粗粉,置于反应容器中,按料液比为1:5~1:25的比例加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封,称定重量,连接好冷凝装置,在微波功率300~700W,超声功率120~600W的条件下提取3~15min得到提取液;

(3)将提取液抽滤后得到滤液,将滤液用80%的甲醇溶液补充至称定的重量,摇匀过

0.22μm微孔滤膜,浓缩干燥,再经纯化后得到山茱萸环烯醚萜苷。

2.根据权利要求1所述的超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法,其特征在于:所述的步骤(2)中,1:15~1:25的比例加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封,称定重量,连接好冷凝装置,在微波功率500~700W,超声功率240~480W的条件下提取6~

12min得到提取液。

3.根据权利要求1所述的超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法,其特征在于:所述的步骤(2)中,1:21的比例加入体积分数为80%的甲醇溶液并密封,称定重量,连接好冷凝装置,在微波功率641W,超声功率360W的条件下提取9min得到提取液。

4.根据权利要求3所述的超声-微波协同提取山茱萸环烯醚萜苷的方法,其特征在于:所述的料液比1:21,微波功率为641W,超声功率为360W和时间9min的提取条件由响应面法优化得到,步骤如下;

1)制备山茱萸环烯醚萜苷样品液;

精密称取山茱萸粗粉1.00g,置于反应瓶中,加入80%甲醇溶液密封,称定重量,连接好回流装置,在超声-微波协同作用下中提取,抽滤,所得滤液再用80%甲醇溶液补至原重量,摇匀,过0.22μm微孔滤膜,得到山茱萸环烯醚萜苷样品液备用;分别精密称取莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷对照品1.00、0.50、0.10、0.20mg,置1mL容量瓶中,用色谱甲醇溶解并定容,0.22μm微孔滤膜过滤即得1.00mg/mL莫诺苷、0.50mg/mL马钱苷、0.10mg/mL獐芽菜苷和0.20mg/mL山茱萸新苷混合对照品溶液;绘制标准曲线得线性回归方程,并根据线性回归方程计算出山茱萸样品液中环烯醚萜苷的含量;

2)单因素实验;根据步骤1)中山茱萸环烯醚萜苷样品液的制备方法,分别按料液比、超声功率、微波功率和提取时间四个单因素设计若干组单因素实验;

3)响应面法优化;以山茱萸环烯醚萜苷提取率为响应因子,采用Design-Expert软件中的Box-Behnken原理在步骤2)中单因素实验的基础上进行响应面实验,模拟得到二次多元回归方程如下:R1= 26.25+0.49A-0.098B+1.42C-0.080D+0.21AB+0.65AC+0.88AD-0.29BC+0.54BD-0

2 2 2

.22CD-0.91A-1.02B-2.89C

其中,R1为相应因子,A为微波功率的影响量,B为超声功率的影响量,C为料液比的影响量,D为时间的影响量;

4)通过Design-Expert软件对回归方程的求解,得到山茱萸环烯醚萜苷提取的最佳条件为:料液比1:21.45、微波功率640.57W、超声功率356.59W、时间9.22min;再以实际操作为约束条件,将修正得到最佳提取工艺参数为:料液比1:21、微波功率641W、超声功率

360W、时间9min。

5.超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷,其特征在于,所述的山茱萸环烯醚萜苷由权利要求1-4中任意一项所述的提取方法制得。

6.根据权利要求5所述的超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷,其特征在于,至少包括莫诺苷、马钱苷、獐牙菜苷和山茱萸新苷四种物质。

7.超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷的测定方法,其特征在于,对权利要求6所述的山茱萸环烯醚萜苷进行测定,包括如下步骤,a.混合对照品溶液的制备;分别精密称取莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、山茱萸新苷对照品1.00、0.50、0.10、0.20mg,置1mL容量瓶中,加色谱甲醇溶解并定容,0.22μm微孔滤膜过滤即得1.00mg/mL莫诺苷、0.50mg/mL马钱苷、0.10mg/mL獐芽菜苷和0.20mg/mL山茱萸新苷混合对照品溶液;

b.供试品溶液的制备,精密称取过40目筛的山茱萸粗粉1.00g,置于XO-200型专用玻璃反应瓶中,加入80%甲醇溶液21mL密封,称定重量,连接好回流装置,于XO-200超声微波组合反应系统中提取9min,取出,抽滤,所得滤液再用80%甲醇溶液补至原重量,摇匀,过

0.22μm微孔滤膜作供试液;

c.测定法;采用HPLC-UV法测定混合对照品及供试品中莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量;具体如下,色谱条件:色谱柱:采用JADE-PAK ODS-AQ色谱柱为C18柱;柱温:35℃;

检测波长:240nm;

梯度洗脱条件:乙腈-0.2%乙酸水溶液梯度洗脱,A为0.2%乙酸水,B为乙腈;流速:

1.0mL/min;进样量:10μL;

以体积百分比计算,梯度洗脱阶段如下,

0~15min,A从90%线性下降至80%,B从10%线性增加至20%;

15~19min,A从80%线性下降至78%,B从20%线性增加至22%;

19~25min,A从78%线性下降至75%,B从22%线性增加至25%;

25~35min,A从75%线性下降至73%,B从25%线性增加至27%;

35~50min,A从73%线性下降至0%,B从27%线性增加至100%,

50~55min,为100%B等度洗脱;

d.根据液相色谱分析结果计算分别得到山茱萸药材中莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷和山茱萸新苷的含量。