1.四重实时荧光定量PCR检测猪呼吸和繁殖障碍疾病相关病毒的试剂盒,其特征是:包括能扩增100-200bp片段的4对引物,带有不同荧光基团的4条探针,具体如下:一、
上游引物PCV2病毒—PR:5’-CAGCACCCTGTAACGTTTGTC-3’下游引物PCV2病毒—PR:5’-TTAGTCTTCCAATCACGCTTCTG-3’特异性PCV2病毒TaqMan荧光探针—P:5’-HEX-TTTCCCGCTCACGTTCAAAAGTTCAG-BHQ1-3’;
二、
上游引物PPV病毒—PR:5’-GCTTTAGCCTTGGAGCCGT-3’下游引物PPV病毒—PR:5’-AAGCAGGCTCTTATGTCGGTT-3’特异性PPV病毒TaqMan荧光 探针—P:5’-FAM-TGGAGCGAGCCAACAACACCAACTT–BHQ1-3’;
三、
上游引物CSFV病毒—PR:5’-GCTCCCTGGGTGGTCTAAG-3’下游引物CSFV病毒—PR:5’-CTCGTCCACATAGCATCTCG-3’特异性CSFV病毒TaqMan荧光探针—P:5’-ROX-CCTGAGTACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCG–BHQ1-3’;
四、
上游引物PRRSV病毒—PR:5’-TCAGCCATAGAAACCTGGAAAT-3’下游引物PRRSV病毒—PR:5’-ACGACAAATGCGTGGTTATCA-3’特异性PRRSV病毒TaqMan荧光探针—P:5’-TAMRA-ACCTCCAGATGCCGTTTGTGCTTGC–BHQ2-3’。
2.根据权利要求1所述的四重实时荧光定量PCR检测猪呼吸和繁殖障碍疾病相关病毒的试剂盒,其特征是:所述试剂盒还包括PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs和耐热TaqDNA聚合酶,阳性对照品,阴性对照品,猪细小病毒PPV标准品、猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV标准品、猪瘟病毒CSFV标准品、猪圆环病毒PCV2标准品。
3.根据权利要求2所述的四重实时荧光定量PCR检测猪呼吸和繁殖障碍疾病相关病毒的试剂盒,其特征是:
4种病毒标准品序列:
PCV2的标准品序列:GAGCACCCTGTAACGTTTGTCAGATTTCCCCGCGGGCTGGCTGAACTTTTGAAAGTGAGCGGGAAAATGCAGAAGCGTGATTGGAAGACTAA,PPV的标准品序列:GCTTTAGCCTTGGAGCCGTGGAGCGAGCCAACAACACCAACTTTCACCAACCTGCACTTAACTCCAACACCGCCAGATTCAGCAATACGGACACCAAGTCCAACTTGGTCAGAAATAGAAACCGACATAAGAGCCTGCTT,CSFV的标准序列:GCTCCCTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAGCCCACCTCGAGATGCTATGTGGACGAG,PRRSV的标准序列:TCAGCCATAGAAACCTGGAAATTCATCACCTCCAGATGCCGTTTGTGCTTGCTAGGCCGCAAGTACATTCTGGCCCGTGCCCACCACGTTGAAAGTGCCGCAGGCTTTCATCCGATTGCGGCAAATGATAACCACGCATTTGTCGT。
4.根据权利要求3所述的四重实时荧光定量PCR检测猪呼吸和繁殖障碍疾病相关病毒的试剂盒,其特征是:阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水,阳性对照为PCV2、PPV、PRRSV、CSFV的阳性质粒样品。
5.如权利要求1~4任一所述的试剂盒在检测PCV、PPV、PRRSV、CSFV的应用。