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专利号: 2014105058526
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.极小单胞菌(Pusillimonas sp.)T2,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,邮编430072,保藏日期为2014年6月23日,保藏编号为CCTCC No:M

2014272。

2.如权利要求1所述极小单胞菌T2在微生物降解尼古丁中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用为:将极小单胞菌T2经发酵培养获得的含菌发酵液离心,沉淀用pH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮制成菌悬液作为酶源,以尼古丁为底物,于无机盐培养基中,在25~45℃、pH值5.5~8.5、100~200rpm、黑暗条件下进行降解反应,反应完全后,实现对尼古丁的降解。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述尼古丁终浓度为100~1500mg/L培养

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基,所述酶源用量以含菌细胞数计为1×10 ~5×10 个/mL培养基。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述每升无机盐培养基中含有NaCl 1g,K2HPO41.5g,KH2PO40.5g,(NH4)2SO41.5g,MgSO40.1g,1ml微量元素溶液,溶剂为超纯水,自然pH值;每升微量元素溶液中含MnSO4·H2O 0.13g,ZnCl2 0.23g,CuSO4·H2O 0.03g,CoCl2·6H2O 0.42g,Na2MoO4·2H2O 0.15g,AlCl3·6H2O 0.05g,溶剂为超纯水。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述酶源按如下步骤制备:

(1)斜面培养:将极小单胞菌T2接种于斜面培养基,20~40℃培养3~5天,获得菌体斜面;所述斜面培养基的终浓度组成为:酵母粉10.0g/L,蛋白胨5.0g/L,氯化钠10.0g/L,琼脂20.0g/L,溶剂为超纯水,pH值自然;

(2)种子培养:从步骤(1)菌体斜面上挑取一接种环菌体接种至无机盐培养基中,25~

40℃培养3~5天,获得种子液;所述每升无机盐培养基组成为:NaCl 1g,K2HPO41.5g,KH2PO40.5g,(NH4)2SO41.5g,MgSO40.1g,1ml微量元素溶液,溶剂为超纯水,自然pH值;每升微量元素溶液组成为:MnSO4·H2O 0.13g,ZnCl2 0.23g,CuSO4·H2O 0.03g,CoCl2·6H2O

0.42g,Na2MoO4·2H2O 0.15g,AlCl3·6H2O 0.05g,溶剂为超纯水;

(3)发酵培养:将步骤(2)获得的种子液以体积浓度10~20%的接种量接种至LB液体培养基中,30℃、150rpm振荡培养至OD600为0.1~0.15,获得发酵液,将发酵液离心,弃上清液,沉淀用pH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮制成菌悬液,即为酶源;所述每升LB液体培养基组成为:酵母粉10.0g,蛋白胨5.0g,氯化钠10.0g,溶剂为超纯水,自然pH值。