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专利号: 2014105105739
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种甲氧苄啶半抗原T2的制备方法,其特征在于:

甲氧苄啶半抗原T2结构简式为:

步骤为:100mL三颈瓶中依次加入10mL吡啶、3.2 g对氨基苯甲酸、5mg 4-二甲氨基吡啶,60℃水浴加热磁力搅拌至溶液澄清;另以10mL 吡啶溶解2.9 g甲氧苄啶并滴加到所述三颈瓶中,继续搅拌反应3天;采用薄层色谱法,以甲醇︰四氢呋喃︰三氯甲烷体积比为1︰1︰5作为展开剂监控反应进程;减压0.092 MPa、60℃蒸馏10min将溶剂全部蒸走,得到黄色油状物;继续滴加质量体积比为10%的NaHCO3水溶液至不再产生浑浊,过滤并调节上清液在pH5.0酸性条件下重结晶析出白色固体, 7500 r/min离心8min,滤饼60℃烘干即为甲氧苄啶半抗原T2。

2.用权利要求1所述方法制得的甲氧苄啶半抗原T2制备甲氧苄啶完全抗原的方法,其特征在于:将甲氧苄啶半抗原T2与载体蛋白偶联后制备得到甲氧苄啶完全抗原;

所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH或人血清白蛋白HAS中的一种。

3.根据权利要求2所述用甲氧苄啶半抗原T2制备甲氧苄啶完全抗原的方法,其特征在于:制备50︰1及100︰1两种甲氧苄啶完全抗原T2-ZD-BSA,步骤为:(1)甲氧苄啶半抗原T2的活化:将甲氧苄啶半抗原T2用DMF溶解,按甲氧苄啶半抗原T2︰盐酸摩尔比1︰2.5混合,盐酸溶液的浓度为1N,在4℃下预冷30min后,逐滴添加新配制的质量体积比为10% 的亚硝酸钠溶液,以淀粉-碘化钾试纸检测呈蓝黑色,继续搅拌反应2h,得到活化的甲氧苄啶半抗原T2溶液;

(2)载体蛋白BSA溶液的配制:取BSA,按甲氧苄啶半抗原T2︰BSA摩尔比分别为50︰1及

100︰1,用0.1M pH9.6的碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的BSA浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5︰1,得到BSA溶液;

(3)完全抗原的制备:将步骤(1)所得14.5mg/mL活化的甲氧苄啶半抗原T2溶液1mL慢速滴加到步骤(2)所得22mg/mL BSA溶液1.5mL及3mL中,室温下反应12h;用PBS缓冲液透析3天,期间换水8次,即得到50︰1及100︰1的两种甲氧苄啶完全抗原T2-ZD-BSA。

4.根据权利要求2或3所述用甲氧苄啶半抗原T2制备甲氧苄啶完全抗原的方法,其特征在于:制备免疫原T2-GA-BSA及包被原T2-GA-OVA的步骤为:(1)甲氧苄啶半抗原T2的活化:将甲氧苄啶半抗原T2用DMF溶解,按甲氧苄啶半抗原T2︰戊二醛反应摩尔比为1︰1.5,在4℃下,搅拌反应2h,再在室温25℃下反应12h,得到活化的甲氧苄啶半抗原T2溶液;

(2)载体蛋白溶液的配置:取BSA及OVA,甲氧苄啶半抗原T2︰BSA/OVA的摩尔比均为100︰

1,用0.1M pH9.6的碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5︰1,得到载体蛋白BSA/OVA溶液;

(3)甲氧苄啶完全抗原的制备:将步骤(1)制备的14.5mg/mL活化的甲氧苄啶半抗原T2溶液1mL,慢速滴加到步骤(2)制备的22mg/mL蛋白BSA溶液1.5mL及OVA溶液3mL中,室温下反应24h,用PBS缓冲液透析3天,期间换水8次,即得到甲氧苄啶免疫原T2-GA-BSA及包被原T2-GA-OVA。

5.用权利要求4所述方法制备的甲氧苄啶完全抗原的应用,其特征在于:通过甲氧苄啶完全抗原免疫得到多克隆抗体和/或单克隆抗体,用于检测甲氧苄啶。