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专利号: 2014105200146
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷C、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法,其特征在于所述方法包括以下步骤:(1)将玄参药材粉碎成粗粉,加入体积分数30%的乙醇溶剂中,加热至回流提取1-3次,提取液趁热过滤,冷却,滤液减压除去溶剂,得到乙醇提取物;

(2)将乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中,用水和乙醇的混合溶剂梯度洗脱,分别收集含有安哥拉苷C的洗脱液、含有桃叶珊瑚苷和哈巴苷的洗脱液,减压回收乙醇,干燥、分别得到安哥拉苷C粗提物、桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物;

(3)将安哥拉苷C粗提物进行高速逆流色谱分离,以体积比为4:6:10的正丁醇、乙酸乙酯、水组成高速逆流溶剂体系,将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置,按上下两相分开,取上相为固定相,下相为流动相,将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱,设定高速逆流色谱仪,在500~1000r/min转速下,以0.5~5mL/min的流速注入流动相,以波长

190-380nm的紫外检测器检测,当明显有流动相流出时,取安哥拉苷C粗提物,用上相、下相体积比1:1的混合溶剂溶解后进样,根据紫外检测器光谱图的峰形收集含安哥拉苷C的流出液,浓缩、干燥,制得安哥拉苷C粗品;

(4)将安哥拉苷C粗品用中低压制备色谱进行纯化,用水、甲醇体积比1:1的混合溶剂进行等度洗脱,流速35mL/min,根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含安哥拉苷C的洗脱液、减压浓缩,冷冻干燥,制得安哥拉苷C纯品;

(5)将桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物进行高速逆流色谱分离,以体积比为2:7:8:8的正丁醇、乙醇、硫酸铵饱和溶液、水组成高速逆流溶剂体系,将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置,按上下两相分开,取下相为固定相,上相为流动相,将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱,设定高速逆流色谱仪,在500~1000r/min转速下,以0.5~5mL/min的流速注入流动相,以波长190-380nm的紫外检测器检测,当明显有流动相流出时,取桃叶珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物,用上相、下相体积比1:1的混合溶剂溶解后进样,定时收集流出液,用HPLC检测,合并相同成分的流出液,分别得到含桃叶珊瑚苷的流出液和含哈巴苷的流出液,浓缩、干燥,分别制得桃叶珊瑚苷粗品A、哈巴苷粗品;

(6)将桃叶珊瑚苷粗品A通过中低压制备色谱分离,用水和甲醇的混合溶剂梯度洗脱,流速35mL/min,波长210nm的紫外检测器检测,定时收集洗脱液,用HPLC检测,合并相同成分的洗脱液,收集得到含桃叶珊瑚苷的洗脱液,浓缩,干燥,制得桃叶珊瑚苷粗品B;

(7)桃叶珊瑚苷粗品B再通过制备液相色谱进行纯化,以甲醇、水体积比5:95的混合溶剂等度洗脱,流速3mL/min,根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含桃叶珊瑚苷的洗脱液,浓缩,干燥,制得桃叶珊瑚苷纯品;

(8)取步骤(5)得到的哈巴苷粗品,通过制备液相色谱进行纯化,以甲醇、水体积比12:

88的混合溶剂等度洗脱,流速3mL/min,根据波长210nm的紫外检测器的光谱图的峰形收集含哈巴苷的洗脱液,浓缩,干燥,制得哈巴苷纯品。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中,乙醇溶剂的体积用量以粗粉的质量计为3~10L/kg,每次回流提取的时间为30-60min,提取次数为1-3次。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中极性的大孔吸附树脂。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述大孔吸附树脂为D101、AB-8、DM301大孔吸附树脂。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述梯度洗脱的程序为:

先用2-6倍柱体积的水洗脱,再用2-6倍柱体积的体积分数10%乙醇的水溶液洗脱,再用2-6倍柱体积的体积分数30%乙醇水溶液洗脱,再用2-6倍柱体积的体积分数50%乙醇水溶液洗脱,再用2-6倍柱体积的体积分数95%乙醇水溶液洗脱。

7.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述梯度洗脱的程序为:

先用5倍柱体积的水洗脱,再用5倍柱体积的体积分数10%乙醇的水溶液洗脱,再用5倍柱体积的体积分数30%乙醇水溶液洗脱,再用5倍柱体积的体积分数50%乙醇水溶液洗脱,再用5倍柱体积的体积分数95%乙醇水溶液洗脱。

8.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(6)中,梯度洗脱的程序是:以甲醇为流动相A,水为流动相B,0min,流动相A的体积百分浓度为5%,设定0至10min,流动相A的体积百分浓度线性上升至10%,10至35min,流动相A的体积百分浓度线性上升至30%,35至

60min,流动相A的体积百分浓度线性上升至50%。

9.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(3)或步骤(5)中,所述紫外检测器的波长为210~254nm。

10.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(3)或步骤(5)中,高速逆流色谱仪的条件为:800r/min转速,流速1.5mL/min。