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专利号: 2014106404634
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.紫红曲霉(Monascus purpureus)浙工红曲1号,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日期为2014年7月18日,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路

1号院3号,保藏编号为:CGMCC No.9553。

2.一种权利要求1所述紫红曲霉浙工红曲1号在制备1-脱氧野尻霉素中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用以紫红曲霉浙工红曲1号经液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种,接种至发酵培养基,在温度25~

40℃、湿度60%~90%的条件下进行固态发酵,发酵完成后,获得含1-脱氧野尻霉素的发酵产物,将发酵产物分离纯化,获得1-脱氧野尻霉素;所述发酵培养基由食用粮食、葡萄糖、蛋白胨和自来水组成,所述食用粮食与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01~

0.1:0.015~0.15:0.2~0.8;

所述液体培养基质量终浓度组成为:70~120目大米粉或可溶性淀粉1%~4%,葡萄糖或蔗糖0.5%~3%,蛋白胨0.3%~3%,NaNO30.1%~0.5%,KH2PO40.1%~0.5%,溶剂为自来水,pH值自然;

所述固体培养基由大米、葡萄糖、蛋白胨和自来水构成,所述大米与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01:0.005:0.3。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述食用粮食为籼米、粳米、糯米、红米、黑米、小米、黄豆、大麦或玉米。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述固体菌种与食用粮食质量比为0.005~

0.05:1,所述液体菌种体积用量以食用粮食质量计为0.1~0.3mL/g。

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6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述紫红曲霉浙工红曲1号以10 ~10 cfu/mL孢子悬液的形式接种至液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种;所述孢子悬液是将紫红曲霉浙工红曲1号接种在EMA培养基上,32℃培养7天,用无菌水洗下孢

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子,将孢子用无菌水调整浓度为10~10 cfu/mL。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述菌种的制备方法为下列之一:(1)将浓度

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为10~10 cfu/mL紫红曲霉浙工红曲1号孢子悬液以体积浓度10%接种量接种至液体培养基,在32℃培养2天,取培养物作为液体菌种;液体培养基质量终浓度组成为:100目大米粉2%,葡萄糖2%,蛋白胨0.8%,NaNO30.2%,KH2PO40.15%,溶剂为自来水,pH值自然;

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(2)将浓度为10~10 cfu/mL紫红曲霉浙工红曲1号孢子悬液接种至固体培养基,在温度为30℃,湿度为80%的条件下培养至培养基表面出现子囊孢子,将培养物作为固体菌种;

所述孢子悬液体积用量以固体培养基质量计为0.1mL/g;所述固体培养基由大米、葡萄糖、蛋白胨和自来水组成,所述大米与葡萄糖、蛋白胨和自来水质量比为1:0.01:0.005:0.3。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵产物分离纯化方法为:将含1-脱氧野尻霉素的发酵产物在55℃真空烘干,磨成80目粉,然后用体积浓度70%乙醇水溶液在

25℃浸提,将浸提液过滤,滤液真空浓缩至膏状,获得浓缩物a;将浓缩物a进行硅胶柱层析,依次用乙酸乙酯、无水乙醇、蒸馏水进行洗脱,收集蒸馏水洗脱的组分,真空浓缩至干,获得浓缩物b;将浓缩物b再通过中性氧化铝柱层析,分别以正己烷,体积比为1:1的乙酸乙酯和石油醚混合液作为洗脱剂进行洗脱,收集含目标组分的洗脱液,真空浓缩至干,获得浓缩物c;将浓缩物c利用制备型TLC层析,以体积比为8:2:1的正丙醇、醋酸和水混合液为展开剂,收集目标组分,用体积浓度50%乙醇水溶液溶解后浓缩干燥,即得到1-脱氧野尻霉素。