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专利号: 201410656527X
申请人: 甘肃农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-08-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种外源24-表油菜素内酯浸种缓解玉米盐与低温不同逆境胁迫伤害的方法,包括如下步骤:

(1)材料准备:玉米种子,24-表油菜素内酯的配制;

(2)种子精选与消毒:选取色泽正常、籽粒饱满、整齐一致的玉米种子,玉米种子分别用

0.5%的次氯酸钠消毒10 min,用蒸馏水冲洗3-5次,用无菌滤纸吸干附着水,得玉米消毒种子;

(3)胁迫下浸种:a.盐胁迫下浸种;将玉米自交系消毒种子分别浸泡在处理液:蒸馏水、

180mmol/L·NaCl、180mmol/L·NaCl+0.025 mg/L·EBR、

180mmol/L·NaCl+0.050mg/L·EBR、180mmol/L·NaCl +0.100mg/L·EBR与

180mmol/L·NaCl+0.200mg/L·EBR的溶液中12h;b.低温胁迫下浸种,即25℃与15℃下浸种;将消毒玉米种子分别浸泡在处理液:蒸馏水、0.001mg/L·EBR、0.010mg/L·EBR、

0.050mg/L·EBR、0.100mg/L·EBR与1.000mg/L·EBR的溶液中12h;盐胁迫种子和低温胁迫种子分别进入步骤4与步骤5;蒸馏水浸种处理为对照样品;

(4)种子萌发:将步骤3所得的盐胁迫和低温胁迫玉米种子分别置于长×宽×高分别为

20cm×15cm ×10cm的塑料发芽盒中,双层滤纸作发芽床,每发芽盒20粒;分别加入步骤3溶液,实验设3次重复;盐胁迫发芽盒置于24~26℃培养箱中暗萌发;低温胁迫发芽盒分别置于24~26℃和14~16℃培养箱中暗萌发;萌发期间每天补加一次15ml对应浓度的溶液,待种子萌发处理4d后,计算发芽势;萌发14d后计算发芽率并在每个样品留取生长一致的10株萌发幼苗测定萌动期幼苗的株高、根长、植株干鲜重,从而确定盐胁迫EBR和低温条件下EBR的最佳浓度进行苗期实验;

(5)幼苗生长:a.盐胁迫实验;蒸馏水、180mmol/L·NaCl、

180mmol/L·NaCl+0.025mg/L·EBR、180mmol/L·NaCl+0.050mg/L·EBR、

180mmol/L·NaCl+0.100mg/L·EBR与180mmol/L·NaCl+0.200mg/L·EBR溶液各100mL分别与500g已灭菌的蛭石搅拌均匀,而后分装于15cm×13cm的营养钵中;b.低温胁迫实验,蒸馏水、0.001mg/L·EBR、0.010mg/L·EBR、0.050mg/L·EBR、0.100mg/L·EBR与1.000mg/L·EBR溶液各100mL分别与500g已灭菌的蛭石搅拌均匀,而后分装于15cm×13cm的营养钵中;将步骤3所得的6个玉米盐胁迫和6个低温胁迫种子,分别播在各对应浓度的消毒蛭石中,每钵20粒,进行胁迫处理,实验设3次重复;播种后置于植物生长室中培养;其中:盐胁迫生长室的昼夜温度为25±1℃/20±1℃;低温胁迫分两组,一组恒温25℃,一组恒温15℃;每天光照16h,黑暗8h,光照强度为600μmol/(s·m2),相对湿度60-80%;期间,每隔1d补加1次

50ml的去离子水,每3d补加一次对应浓度的处理液50ml,胁迫处理14d后,待对照样品叶片生长到三叶一心时,每个样品留取生长一致的10株盐胁迫处理幼苗与低温胁迫处理幼苗进入步骤6.2测定幼苗株高、根长、干鲜重;叶片相对电导率、MDA;POD、SOD、CAT、APX;可溶性糖、脯氨酸含量;

(6)各项指标测定

6.1将步骤(4)过程中每天记录种子发芽数并计算发芽率、发芽势、发芽指数;所得的萌发期幼苗用去离子水冲洗干净,测量株高、根长、植株鲜重后,置烘箱中105℃杀青30min再于80℃烘箱中烘干至恒重,测量植株干重;

6.2将步骤(5)所得的盐胁迫处理幼苗与低温胁迫处理幼苗用去离子水冲洗干净,测量株高、根长、植株鲜重后,置烘箱中105℃杀青30min再于80℃烘箱中烘干至恒重,测量植株干重;叶片相对电导率、MDA;POD、SOD、CAT、APX;可溶性糖、脯氨酸含量;

(7)结果分析与最适EBR浓度筛选:对步骤6.1与步骤6.2测得的盐胁迫和低温胁迫处理幼苗的每个样品中的各项数据,采用Microsoft Excel2003软件进行数据处理,所有实验数据统计分析SPSS19.0进行处理,试验结果用平均值±标准偏差(SD)表示,采用Duncan’s新复极差法进行多重比较,对各处理进行显著性差异分析;根据种子萌发时的发芽率、发芽势、发芽指数、盐害指数;苗期株高、根长、植株干鲜重筛选最佳EBR浓度,并找出EBR对玉米种子萌发期和苗期的影响。

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