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专利号: 2014106889368
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于单克隆抗体的检测丁香属植物中丁香假单胞菌丁香致病变种的双抗体夹心酶联免疫法,其特征在于步骤为:(1)丁香假单胞菌丁香致病变种单克隆抗体的制备以丁香假单胞菌丁香致病变种NCPPB 2844菌体做为免疫原,免疫 8周龄的BALB/c小鼠,经杂交瘤技术融合、筛选,得到7个细胞株;

(2)单克隆抗体的配对筛选

将纯化后的7株单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP,直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对;配对参数如下:包被抗体2μg/mL;包被液为0.01M、pH9.6的碳酸盐缓冲8

液;标品浓度1×10cfu/mL;标品稀释液0.01M、pH7.2 的PBS+0.2%Tween;酶标抗体稀释

500倍使用;在此条件下,实验成功得到了5对P/N值>2.1的配对;

(3)夹心法的建立

选择检测限稳定、灵敏的配对,即以编号13B10抗体即CGMCC No.9801单克隆细胞株L作为包被抗体,编号13B10抗体标记辣根过氧化酶HRP后作为酶标检测抗体13B10-HRP,建立夹心法;具体参数如下:包被抗体13B10浓度:2μg/mL;

包被液:0.01M、pH 9.6碳酸盐缓冲液;

标品稀释液:0.01M、pH7.2 PBS+0.2%Tween;

酶标检测抗体13B10-HRP浓度:2.5μg/mL;

反应时间:包被抗体:封闭37℃,反应2h;标准品:37℃,反应1h;酶标检测抗体:37℃,反应1h;显色时间10min。

2.根据权利要求1所述基于单克隆抗体的检测丁香属植物中丁香假单胞菌丁香致病变种的双抗体夹心酶联免疫法,其特征在于丁香假单胞菌丁香致病变种夹心法的LOD:4

2.4×10 cfu/mL。