1.一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：A、溶液的配制

(1)碳酸氢氨溶液的配制：分别用H216O和H218O配制碳酸氢氨溶液；

(2)酶溶液的配制：分别用H216O和H218O配制胰蛋白酶溶液；

(3)猪皮明胶溶液的配制：用H216O和H218O配制碳酸氢氨溶液溶解猪皮明胶，分别得到溶于H216O和H218O的猪皮明胶溶液；

B、同位素标记

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(1)加酶：将H2 O配制的胰蛋白酶溶液加入H2 O配制的猪皮明胶溶液中，将H2 O配制的胰蛋白酶溶液加入H218O配制的猪皮明胶溶液中；

(2)酶解和标记：酶解和标记过程同时进行；

(3)终止反应；

C、HPLC-FTICR-MS检测

(1)标记物和未标记物的混合：以H218O中的猪皮明胶酶解物为内标与H216O中的猪皮明胶酶解物进行混合；

(2)上样检测：混合样品注射进入于FTICR-MS设备连接的HPLC中，对经过HPLC分离的猪皮明胶水解物进行检测，上样量为0.5-20μg；

D、数据分析：

(1)根据氨基酸序列，寻找猪皮明胶的特征峰；

同位素标记实现特征性质谱峰的质荷比偏移，具体为：未标记时，胰蛋白酶处理后的猪皮明胶酶解物中特征峰为925.42212+-925.46212+，相应的氨基酸序列为GEPG*PTGVQGP*PGPAGEEGK,*表示P被羟基化，经18O标记后，特征峰的质荷比变成927.42212+-927.46212++，氨基酸序列GEPG*PTGVQGP*PGPAGEEGK中K的羧基末端两个16O原子被18O代替；

或者，未标记时，胰蛋白酶处理后的猪皮明胶酶解物中特征峰为929.46232+-929.50232+，相应的氨基酸序列为IG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK,*表示P被羟基化，经18O标记后，特征峰的质荷比变成931.46232+-931.50232+，氨基酸序列IG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK中K的羧基末端两个16O原子被18O代替；

(2)分析并记录特征峰在标记前后的峰强度；

(3)定量方法的准确性分析：通过比较标记物/未标记物即18O/16O的计算值与实际混合比例检验定量方法的准确性，18O/16O按照如下公式计算：

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其中，I0、I2和I4分别代表未标记即 O的特征肽在实验中测得的单一同位素峰强度，质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度；M0、M2和M4分别代表未标记即16O的特征肽在理论上的单一同位素峰强度，质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度。

2.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：步骤A中，配制的碳酸氢氨溶液浓度为10-100mM；配制的胰蛋白酶溶液浓度为0.01-

1mg/ml；

猪皮明胶溶液的配制是用10-100mM的碳酸氢氨溶液溶解猪皮明胶，分别得到0.1-

10mg/ml的猪皮明胶溶液。

3.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：所述步骤B同位素标记当中，H216O配制的胰蛋白酶溶液和猪皮明胶溶液的质量比为1:200-1:10mg/mg，H218O配制的胰蛋白酶溶液和猪皮明胶溶液的质量比为1:200-1:

10mg/mg；

所述酶解和标记反应温度为15-50℃，反应时间为4-30h；

所述终止反应条件为将酶解液置于70-100℃中5-30min。

4.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：以H218O中的猪皮明胶酶解物为内标与H216O中的猪皮明胶酶解物按照质量比mg/mg为1:50-50:1混合。