1.一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：A、溶液的配制

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（1）碳酸氢氨溶液的配制：分别用H2 O和H2 O配制碳酸氢氨溶液；

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（2）酶的配制：分别用H2 O和H2 O配制胰蛋白酶溶液；

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（3）猪皮明胶溶液的配制：用H2 O和H2 O配制碳酸氢氨溶液溶解猪皮明胶，分别得到

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溶于H2 O和H2 O的猪皮明胶溶液；

B、同位素标记

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（1） 加酶：将H2 O配制的胰蛋白酶加入H2 O配制的猪皮明胶中，将H2 O配制的胰蛋白

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酶加入H2 O配制的猪皮明胶中；

（2）酶解和标记：酶解和标记过程同时进行；

（3）终止反应；

C、HPLC-FTICR-MS检测

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（1）标记物和未标记物的混合：以H2 O中的猪皮明胶水解物为内标与H2 O中的猪皮明胶水解物进行混合；

（2）上样检测：混合样品注射进入于FTICR-MS设备连接的HPLC中，对经过HPLC分离的猪皮明胶水解物进行检测，上样量为0.5-20 μg；

D、数据分析：

（1）根据氨基酸序列，寻找猪皮明胶的特征峰；

（2）分析并记录特征峰在标记前后的峰强度；

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（3）定量方法的准确性分析：通过比较标记物/未标记物即 O/ O的计算值与实际混

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合比例检验定量方法的准确性，O/ O按照如下公式计算：

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其中，I0, I2 和 I4分别代表未标记即 O的特征肽在实验中测得的单一同位素峰强度，

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质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度；M0, M2 和 M4分别代表未标记即 O的特征肽在理论上的单一同位素峰强度，质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度。

2.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：所述配制的碳酸氢氨溶液为10-100 mM；

所述配制的胰蛋白酶溶液为0.01-1 mg/ml；

所述猪皮明胶溶液的配制是用10-100 mM的碳酸氢氨溶液溶解猪皮明胶，分别得到

0.1-10 mg/ml 的猪皮明胶溶液。

3.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶

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的方法，其特征是：所述同位素标记当中，H2 O配制的胰蛋白酶和猪皮明胶的质量比为

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1:200-1:10， H2 O配制的胰蛋白酶和猪皮明胶的质量比为1:200-1:10；

所述酶解和标记反应温度为15-50 ℃，反应时间为4-30 h；

所述终止反应条件为将酶解液置于70-100℃中5-30min。

4.根据权利要求1所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方

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法，其特征是：所述以H2 O中的猪皮明胶水解物为内标与H2 O中的猪皮明胶水解物按照质量比mg/mg为1:50-50:1混合。

5.根据权利要求1、2、3或4所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征在于：所述实现特征性质谱峰的质荷比偏移，具体为：

2+- 2+

未标记时，胰蛋白酶处理后的猪皮明胶酶解物中特征峰为925.4221 925.4621 ，相应

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的氨基酸序列为GEPG*PTGVQGP*PGPAGEEGK，其中*表示P被羟基化，经 O标记后，特征峰

2+- 2++，

的质荷比变成927.4221 927.4621 氨基酸序列GEPG*PTGVQGP*PGPAGEEGK中K的羧基末

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端两个 O原子被 O代替。

6.根据权利要求1、2、3或4所述的一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征在于：所述实现特征性质谱峰的质荷比偏移，具体为：

2+- 2+

未标记时，胰蛋白酶处理后的猪皮明胶酶解物中特征峰为929.4623 929.5023 ，相应

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的氨基酸序列为IG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK，其中*表示P被羟基化，经 O标记后，特征

2+- 2+

峰的质荷比变成931.4623 931.5023 ，氨基酸序列IG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK中K的羧

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基末端两个 O原子被 O代替。