1. 一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征是： A、 牛皮明胶酶解 (1) 加入碳酸氢氨溶液配制牛皮明胶溶液； (2) 加入胞内蛋白酶Lys-C，使牛皮明胶酶解； (3) 再加入胰蛋白酶使牛皮明胶酶解； B、 同位素标记 (1) 加酶：将胰蛋白酶加入经胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶酶解的牛皮明胶水解物 中； (2) 冻干； (3) 进一步去除水分； (4) 标记：一份牛皮明胶酶解物中加入H216O,另一份牛皮明胶酶解物中加入H2 18O,进行 标记； C、 HPLC-LTQ Orbitrap MS 检测 (1) 将标记物和未标记物混合； (2) 上样检测：将混合样品注射进入HPLC-LTQ Orbitrap MS设备，检测牛皮明胶酶解 物中H216O标记的特征峰和H218O标记的特征峰，上样量为0. 5-20 g ; D、 数据分析 (1) 根据氨基酸序列，寻找牛皮明胶的特征峰； (2) 分析并记录特征峰在标记前后的峰面积； (3) 定量方法的准确性分析，即通过比较标记物/未标记物即180/160的计算值与实际 混合比例检验定量方法的准确性，18CV16O按照如下公式计算：其中，Itl, I2和I4分别代表未标记即16O的特征肽在实验中测得的单一同位素峰面积， 质量高2Da的峰面积和质量高4Da的峰面积；Mtl, M2和M4分别代表未标记即16O的特征肽 在理论上的单一同位素峰面积，质量高2Da的峰面积和质量高4Da的峰面积。

2. 根据权利要求1所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征是： 所述牛皮明胶溶液的配比中加入10 mM的碳酸氢氨溶液溶解得到I mg/ml的牛皮明胶 溶液； 所述加入胞内蛋白酶酶解时，胞内蛋白酶与牛皮明胶质量比mg/mg为1:100,酶解温 度为37 °C，反应时间为4 h; 所述再加入胰蛋白酶酶解时，胰蛋白酶和牛皮明胶质量比mg/mg为1:50,酶解温度为 37 °C，反应时间为12 h。

3. 根据权利要求1所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征是： 所述同位素标记中胰蛋白酶和牛皮明胶质量比为1:100-1:1 ; 所述冻干温度为-30至_80°C，冻干时间为2-24h; 所述进一步去除水分的条件是：加入20-200 iU色谱乙腈，常温下真空干燥 l〇-60min ； 所述标记中H216O或H218O与牛皮明胶酶解物的质量比为10:1-100:1，标记所需温度为 10-60°C，时间为 3-48h。

4. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰为 591. 79742-591. 83742+，相应的氨基酸序列为EGPVGL*PGIDGR，其中*表示P被羟基化，经18O 标记后，特征峰的质荷比变成59 3 . 79 742+_59 3 . 8 3 742+'氨基酸序列EGPVGL*PGIDGR中R的羧 基末端两个16O原子被18O代替。

5. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰为 634. 32972-634. 36972+，相应的氨基酸序列为GI*PGPVGAAGATGAR，其中*表示P被羟基化，经18O标记后，特征峰的质荷比变成636. 32972-636. 36972+，氨基酸序列GI*PGPVGAAGATGAR中 R的羧基末端两个16O原子被18O代替。

6. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰为 714. 35762-714. 39762+，相应的氨基酸序列为GI*PGEFGL*PGPAGAR，其中*表示P被羟基化， 经18O标记后，特征峰的质荷比变成716. 35762-716. 39762+'氨基酸序列GI*PGEFGL*PGPAGAR 中R的羧基末端两个16O原子被18O代替。

7. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰为 780 . 90 1 02-780 . 94 1 02+，相应的氨基酸序列为GETGPAGPAGPIGPVGAR，经18O标记后，特征峰的 质荷比变成7 8 2 . 90 1 02-78 2 . 94 1 02+'氨基酸序列GETGPAGPAGPIGPVGAR中R的羧基末端两个 16O原子被18O代替。

8. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰 为790. 87712-790. 91712+，相应的氨基酸序列为GP*PGESGAAGPTGPIGSR，其中*表示 P被羟基化，经18O标记后，特征峰的质荷比变成792.87712+_792.9171 2+'氨基酸序列 GP*PGESGAAGPTGPIGSR中R的羧基末端两个16O原子被18O代替。

9. 根据权利要求1、2或3所述的一种牛皮明胶的定量检测方法，其特征在 于：未标记时，胞内蛋白酶Lys-C和胰蛋白酶处理后的牛皮明胶酶解物中特征峰为 923. 44312-923. 48312+，相应的氨基酸序列为 TG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK，其中 * 表 示P被羟基化，经18O标记后，特征峰的质荷比变成925. 44312-925. 48312+'氨基酸序列 TG*P*PGPSGISGPPGP*PG*PAGK中K的羧基末端两个16O原子被18O代替。