1.一种基于γ-聚谷氨酸接枝多巴胺@壳聚糖复合胶束的免疫传感器的制备方法,其特征在于大分子胶束的制备、大分子胶束修饰电极的制备、免疫传感器的构建,具体步骤如下:(1)大分子胶束的制备
将壳聚糖溶液逐滴加入到40~50倍其体积的γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液中,以500~
1000rpm的转速搅拌,使壳聚糖与γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液通过静电作用自组装形成大分子胶束,继续以500~1000rpm的转速搅拌5h~12h,使胶束聚合物组装完全;将所得大分子胶束溶液通过孔隙800nm的针式过滤器,得到粒径均匀分布的大分子胶束溶液即γ-聚谷氨酸接枝多巴胺@壳聚糖复合胶束溶液;
(2)大分子胶束修饰电极的制备
将所述大分子胶束溶液通过滴涂、电泳沉积的方法修饰在传感电极表面,形成粒子膜,室温晾干,制得大分子胶束修饰电极;
所述电极为金电极、铂电极、玻碳电极或ITO玻璃电极;
(3)免疫传感器的构建
将制得的大分子胶束修饰电极浸入氯金酸水溶液中,通过恒电位还原氯金酸在电极表面修饰纳米金粒子;再将纳米金修饰的电极浸入含抗体的磷酸盐缓冲溶液中与抗体结合;
最后将结合抗体的电极浸入牛血清蛋白溶液中以封闭非特异性结合位点,即制得免疫传感器。
2.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(1)中壳聚糖溶液的浓度0.5mg/mL~1.0mg/mL,溶剂为质量分数为1%~5%的醋酸水溶液或盐酸水溶液;
γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液的浓度0.05mg/mL~0.5mg/mL,溶剂为去离子水或超纯水。
3.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中电极在使用前需经预处理,预处理的方法为:(1)抛光处理:电极依次用1.0μm、0.05μm的氧化铝粉末在麂皮上抛光至镜面,依次用无水乙醇、超纯水、无水乙醇分别超声3min清洗电极表面,氮气吹干电极;
(2)将吹干的电极置于5mol/L的铁氰化钾溶液中,在-200mV~600mV范围内进行循环伏安测试,使扫描峰电位差小于100mV,否则将电极重新进行抛光处理。
4.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中电泳沉积方法为将电极浸入大分子复合胶束溶液中,施加与复合胶束荷电相反的恒电位,使大分子复合胶束沉积在电极表面形成胶束粒子膜;修饰电极为工作电极,铂丝电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极;电沉积工艺条件为:恒电位0.1V~10V,电沉积时间10s~600s。
5.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中滴涂方法为用微量进样器吸取5~10μL复合胶束溶液滴涂于电极表面,室温下自然干燥,形成粒子膜,制得大分子胶束修饰电极。
6.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(3)中构建免疫传感器的具体步骤为:(1)将大分子胶束修饰的电极浸入0.02mg/mL~0.2mg/mL的氯金酸水溶液中,通过恒电位还原氯金酸,在大分子胶束修饰电极表面生成均匀分散的纳米金粒子;恒电位-0.1V~-
2.0V,还原时间10s~300s;
(2)将步骤(1)所得的电极浸入含抗体的pH 6.0~pH 7.5的磷酸盐缓冲液中,在4℃条件下浸泡12~24h后取出,制得表面吸附有抗体的修饰电极;
(3)再将步骤(2)所得表面吸附有抗体的修饰电极浸入5mg/mL~10mg/mL的牛血清蛋白溶液中,在37℃下孵育0.5h~2h以封闭非特异性吸附位点,制得所述免疫传感器;
(4)将所制备的免疫传感器浸入pH 6.0~pH 7.5的磷酸盐缓冲液中,4℃以下保存备用。
7.根据权利要求6所述的免疫传感器的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中的抗体为卵巢癌相关抗体、乳腺癌相关抗原、胃肠癌相关抗体、血管内皮生长因子、人体绒毛膜促性腺激素、前列腺癌抗体或微囊海藻素抗体。