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专利号: 2014107536683
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于检测癌细胞标志物微小核糖核酸的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中包含四螺旋结构DNA分子探针、引物1、引物2、发夹DNA、聚合酶、切刻内切酶、缓冲液和SERS信号探针;

所述四螺旋结构DNA分子探针的制备方法包括:

用0.1M咪唑-盐酸盐中性溶液清洗、活化磁珠;将200μL序列三的溶液加入到200μL咪唑溶液活化好的磁珠混合,反应6h后加入200μL序列一和序列二的溶液,放在体积1L的保温桶里,80℃水浴中随室温缓慢降温12h,磁分离洗涤后,得连有磁珠的四螺旋结构DNA分子探针,稀释至200μL备用;

所述序列一为:

5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTAGGGAACGATCCCGACTGTGCCA-3';

所述序列二为:

5'-AGAAAGGAGGACTTTCATACCTCGAGGACCTCAGCAGCTTCGAGCCTGGTGCGTGCTCAGTCACTGAGCAACTCAACTCGCCATCTGAGTCTGGACACGCTGCAGGCTCGAAGCTGC-3';

所述序列三为:

5'-NH2-T6-GGTCACAGTCGGGATCGTTCCTGAGTTGCTCAGTGACTGAGCACGCACCAGGCTCGAAGCTGCTTTAAGCCTCACGGTTCGCATGACGGGTCAACC-TGCGTCGACGTGTCCCTGGACTTTAAGAAATCTCGAGCTTCGAGCCTGCAGCGTGTCCAGACTCAGATGGCGAGTCTAGCTTATC-3';

所述引物1的序列为:

5'-AGAGTTACTTAG-3';

所述引物2的序列为:

5'-TGGCACAGTCGGGAT-3';

所述发夹DNA的序列为:

5'-NH2-T6-AGAAAGGAGGACTTTCATACCTCGAGGACCTCAGCGTCCTCCTTTCT-3';

所述SERS探针的制备方法包括:

将序列五的ROX-DNA和序列四的捕获探针DNA按50:1的比例均匀混合,然后加入一定量的TCEP活化30min。随后在活化好的DNA混合液中加入1mL新鲜制备的金纳米粒子溶液,轻微振荡避光反应6h,将金纳米粒子溶液与DNA的混合溶液在10mM醋酸盐缓冲液中避光放置8h,在经过12000rpm的转速离心30min后,洗涤后得到油状物,即SERS信号探针;

所述序列五为5'-ROX-TTTTTTCCTAGCGAC-SH-3';

所述序列四为5'-SH-AGAAAGGAGGACGC-3'。