1.一种从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于步骤如下:
(1)大豆乳清的预处理:将大豆乳清调至pH 4.5-4.8,9500rpm离心30min,除沉淀;再次调至pH 8.0-10.0,9500rpm离心30min,收集上清液,即得大豆乳清液;
用pH调节剂调节pH;
(2)大豆乳清蛋白的初级分离:取步骤(1)所得大豆乳清液,调节pH至4.5,在4-30℃下加入硫酸铵至终饱和度为50%,9500rpm离心30min,收集沉淀,继续向上清中添加硫酸铵至饱和度60%-80%,9500rpm离心30min,收集沉淀;合并两次沉淀,加入去离子水溶解,使沉淀的质量浓度为1%-10%,截留分子量3500透析脱盐36-72h,截留液用真空冷冻干燥仪进行干燥,制得含有大豆凝集素和β-淀粉酶的P-7S蛋白;
(3)大豆乳清蛋白与聚阴离子多糖复凝聚:将步骤(2)制备的P-7S蛋白,用去离子水配制终浓度为0.1%-0.4%的P-7S大豆乳清蛋白液,调节pH至7.0,待用;配制0.1%-0.4%的聚阴离子多糖溶液,调节pH至7.0;向P-7S大豆乳清蛋白液中缓慢加入按P-7S大豆乳清蛋白液体积计2.5%-8%的聚阴离子多糖溶液,调节pH至5.0-4.5,4000rpm离心20min,收集沉淀;对上清液再次重复沉淀1次,合并沉淀物,即得大豆凝集素与聚阴离子多糖的复合物;
(4)回收大豆凝集素:将步骤(3)所得大豆凝集素与聚阴离子多糖的复合物悬浮于
2-3倍体积的去离子水中,调节pH至7.0-9.0,过超滤膜除糖,收集滤过液;截留分子量
3000-4000超滤脱盐,截留液用真空冷冻干燥仪进行干燥,即得纯化的大豆凝集素。
2.根据权利要求1所述的从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于:所述聚阴离子多糖包括但不限于卡拉胶,硫酸酯化半乳聚糖及硫酸酯化多糖,阿拉伯胶,海藻酸钠或果胶;其相对分子量范围为300-2000kD。
3.根据权利要求1所述的从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于步骤(1)所述大豆乳清的来源:收集常规的大豆分离蛋白生产形成的副产物或实验室利用脱脂豆粕经醇洗后,提取分离蛋白后所得的大豆蛋白乳清液,进行预处理。
4.根据权利要求3所述的从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于大豆乳清的预处理步骤为:首先将大豆蛋白乳清液调节pH至4.5-4.8,静止1-2d,离心,除杂蛋白完全,再调节至pH 8.0-10.0,9500rpm离心30min,收集上清液,即得大豆乳清液。
5.根据权利要求1所述的从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于: 步骤(4)中超滤膜除糖截留分子量范为100-300kD;脱盐处理包括但不限于透析,超滤,纳滤,需保证脱盐完全。
6.根据权利要求1所述的从大豆乳清中分离纯化大豆凝集素的方法,其特征在于:所述pH调节剂为:调节酸性:有机酸:包括但不限于甲酸、乙酸;无机酸:包括但不限于盐酸,硫酸;优先选择无机酸;调节碱性:包括但不限于氢氧化钠,氢氧化钾,碳酸氢钠,优先选择氢氧化钠。