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专利号: 2014107991471
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述的方法为:以嗜烟碱节杆菌(Arthrobacter nicotinovorans)WYG001经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体冷冻干燥后的干菌体为催化剂,以N-BOC-DL-2-氨基丁酸酯为底物,以0.1M、pH7.0磷酸缓冲液为反应介质,在20~40℃、200rpm条件下进行转化反应,反应结束后,将反应液分离纯化,获得N-BOC-D-2-氨基丁酸酯;所述嗜烟碱节杆菌WYG001,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2014054,保藏日期2014年2月28日,地址为中国,武汉,武汉大学,邮编430072。

2.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述催化剂的制备方法为:(1)斜面培养:将嗜烟碱节杆菌WYG001接种至斜面培养基,30℃培养24h,获得菌体斜面;每升斜面培养基组成:牛肉膏5g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂20g,pH 7.0-7.2,加水至1000mL;

(2)种子培养:从斜面菌体挑取一接种环菌体接种至种子培养基,在30℃、200r/min培养24h,获得种子液;种子培养基组成:蛋白胨10g/L,酵母膏5g/L,NaCl 10g/L,溶剂为水,pH 

7.0;

(3)发酵培养:在无菌条件下,以体积浓度6-8%的接种量将种子液接种于产酶培养基中,30℃、200r/min培养24h,获得发酵液,培养结束后将发酵液12000rpm离心10min,弃上清液,得到嗜烟碱节杆菌WYG001湿菌体;产酶培养基组成为:乳糖5-15g/L,酵母膏10-14g/L,NaCl 10g/L,MgSO4 0.22g/L、KH2PO4 0.136g/L,溶剂为水,pH 7.0;

(4)取步骤(3)湿菌体以1.2g/ml的量加入pH 7.0、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中,搅拌均匀,-80℃条件下冷冻干燥,得到干菌体。

3.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述湿菌体的用量以缓冲液体积计为1~200g/L。

4.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述干菌体的用量以缓冲液体积计为1~100g/L。

5.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述底物初始浓度为1~50g/L。

6.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述N-BOC-DL-2-氨基丁酸酯为N-BOC-DL-2-氨基丁酸甲酯、N-BOC-DL-2-氨基丁酸乙酯或N-BOC-DL-2-氨基丁酸丙酯。

7.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述反应液分离纯化的方法为:反应结束后,将反应液离心,取上清液,加入等体积的乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层减压蒸馏至干脱除溶剂,得到N-BOC-D-2-氨基丁酸酯。

8.如权利要求2所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于产酶培养基组成为:乳糖10g/L,酵母膏12g/L,NaCl 10g/L,MgSO4 0.22g/L、KH2PO4 0.136g/L,溶剂为水,pH 

7.0。

9.如权利要求1所述N-BOC-D-2-氨基丁酸酯的制备方法,其特征在于所述反应在20~

40℃反应1~30h。