1.一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)重组菌株初筛:将经过低能离子注入介导秦艽总基因组DNA转化处理后的出发酵母菌株接种至YPD固体培养基上进行培养得到转化子,提取转化子基因组DNA,以转化子基因组DNA为模板,针对MECT基因、MECPS基因以及GGPPS基因的特异性片段分别进行三轮PCR扩增,并分别对扩增产物进行核酸电泳分析,根据电泳分析结果从转化子中筛选得到同时含有MECT基因片段、MECPS基因片段以及GGPPS基因片段的重组酵母菌株;
2)重组菌株复筛:将步骤1)筛选得到的重组酵母菌株于YPD液体培养基中进行发酵培养,通过对发酵培养所得发酵液进行HPLC分析筛选得到产龙胆苦苷重组酵母菌株。
2.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法,其特征在于:
采用上游引物F1和下游引物R1对所述MECT基因的特异性片段进行PCR扩增,上游引物F1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示,下游引物R1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法,其特征在于:
采用上游引物F2和下游引物R2对所述MECPS基因的特异性片段进行PCR扩增,上游引物F2的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示,下游引物R2的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。
4.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法,其特征在于:
采用上游引物F3和下游引物R3对所述GGPPS基因的特异性片段进行PCR扩增,上游引物F3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示,下游引物R3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示。