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专利号: 2015100538536
申请人: 广西医科大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于还原型氧化石墨烯催化银沉积的电化学检测方法,包括下述:

1)工作电极的制备

在金电极上修饰可被待检测物特异性识别的DNA探针,得到工作电极;

所述待检测物为酶、核酸或蛋白质;

2)标准曲线的绘制

A、将多个所述工作电极分别与多个不同组成的标准样品溶液中的每一个进行反应,得到多个经标准样品溶液处理后的工作电极;

所述多个不同组成的标准样品溶液中的每一个均为含下述组分的溶液:已知比活力的待检测物和能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质;

所述多个不同组成的标准样品溶液中的每一个中的所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质的含量均相等;

所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质为限制性内切酶;

B、将所述多个经标准样品溶液处理后的工作电极中的每一个分别与还原型氧化石墨烯进行孵育,得到多个负载有还原型氧化石墨烯的工作电极,将所述多个负载有还原型氧化石墨烯的工作电极中的每一个与含银离子的溶液发生银沉积反应,得到多个沉积有银单质的工作电极;

C、用含有硝酸根离子的溶液将所述多个沉积有银单质的工作电极中的每一个沉积有银单质的工作电极上的银单质溶出,在此溶出过程中,利用线性扫描伏安法测定银单质的溶出伏安电流值,以所述多个标准样品的比活力为横坐标,测得的银单质溶出伏安电流值为纵坐标,绘制样品比活力测定的标准曲线;

3)待测样品的检测

a、将所述工作电极与待测样品溶液进行反应,得到经待测样品溶液处理后的工作电极;

所述待测样品溶液为含下述组分的溶液:未知比活力的待检测物和所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质;

其中,所述待测样品溶液中的所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质的含量与所述多个不同组成的标准样品溶液中的每一个中的所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质的含量相等;

b、将所述经待测样品溶液处理后的工作电极与所述还原型氧化石墨烯进行反应,得到负载有还原型氧化石墨烯的工作电极,将所述负载有还原型氧化石墨烯的工作电极与所述含银离子的溶液发生银沉积反应,得到沉积有银单质的工作电极;

c、用所述含有硝酸根离子的溶液将所述沉积有银单质的工作电极上的银单质溶出,在此溶出过程中,利用线性扫描伏安法测定银单质的溶出伏安电流值,根据所述标准曲线,得到所述待测样品溶液中待测样品的比活力;

所述含银离子的溶液由下述组分组成:甘氨酸、硝酸银和双氧水。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述1)中,所述工作电极的制备为:先用巯基化的DNA探针对金电极表面进行修饰,然后用巯基己醇封闭所述电极,最后用互补链对所述DNA探针进行杂交,得到工作电极。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:当所述待检测物为dam甲基化酶时,所述巯基化的DNA探针为5'-CTCCCTAATAACAATGATCACTATTCCT-SH-3',其中,CTCCCTAATAACAATGATCACTATTCCT为探针序列,在所述探针序列3'端连有巯基。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述2)A中,所述已知比活力为

0-80.0U/mL。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述2)A中,当所述待检测物为dam甲基化酶时,所述能够将被待测物特异性识别的所述DNA探针切割成寡核苷酸单链的物质为DPnⅠ限制性内切酶和S-腺苷甲硫氨酸的混合物。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述2)B和3)b中,所述孵育的温度为室温,时间为4-6小时;

所述银沉积反应的温度为25℃,时间为3分钟。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:所述2)C和3)c中,所述含有硝酸根离子的溶液为含有硝酸钾的硝酸溶液;

所述2)C和3)c中,所述线性扫描伏安法的电压范围为-0.4-1.0V,扫描速率为50-

100mV/s。