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专利号: 2015100654306
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液,其特征在于,所述培养液为:添加了12~18%FBS,50~60μMβ-巯基乙醇,0.8~1.2%ITS,0.8~1.2%L-谷氨酰胺,0.8~

1.2%核苷酸,45~55μg/mL维生素C和0.8~1.2%双抗的DMEM培养基。

2.根据权利要求1所述的长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液,其特征在于,所述培养液为:添加了15%FBS,55μMβ-巯基乙醇,1%ITS,1%L-谷氨酰胺,1%核苷酸,50μg/mL维生素C和1%双抗的DMEM培养基。

3.一种长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)、取长白仔猪睾丸组织,机械法和酶消化法获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后,完全培养基培养1~2h后更换新鲜培养液,继续培养,传代至获得细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞;

2)、利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染F3代的睾丸成纤维细胞,进行细胞筛选,传代至得到稳定表达Egfp的细胞株;

3)将稳定表达Egfp的细胞株进行单细胞筛选,筛选出表达睾丸支持细胞标记的细胞株,使用权利要求1或2所述的培养液传代50代以上,经细胞生物学分析检测,获得长白仔睾丸支持细胞永生系。

4.根据权利要求3所述的长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,步骤2)中所述传代的代数为9代。

5.根据权利要求3所述的长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,步骤3)中所述细胞生物学检测为生长曲线分析、特异性基因分析、细胞核型分析、特异性蛋白分析、致瘤性分析和ST细胞系对比。

6.权利要求1~5任一项所述的建立方法建立的长白仔睾丸支持细胞永生系。