1.一种长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液,其特征在于,所述培养液为:添加了12~18%FBS,50~60μMβ-巯基乙醇,0.8~1.2%ITS,0.8~1.2%L-谷氨酰胺,0.8~
1.2%核苷酸,45~55μg/mL维生素C和0.8~1.2%双抗的DMEM培养基。
2.根据权利要求1所述的长白仔睾丸支持细胞永生系建立用的培养液,其特征在于,所述培养液为:添加了15%FBS,55μMβ-巯基乙醇,1%ITS,1%L-谷氨酰胺,1%核苷酸,50μg/mL维生素C和1%双抗的DMEM培养基。
3.一种长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)、取长白仔猪睾丸组织,机械法和酶消化法获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后,完全培养基培养1~2h后更换新鲜培养液,继续培养,传代至获得细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞;
2)、利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染F3代的睾丸成纤维细胞,进行细胞筛选,传代至得到稳定表达Egfp的细胞株;
3)将稳定表达Egfp的细胞株进行单细胞筛选,筛选出表达睾丸支持细胞标记的细胞株,使用权利要求1或2所述的培养液传代50代以上,经细胞生物学分析检测,获得长白仔睾丸支持细胞永生系。
4.根据权利要求3所述的长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,步骤2)中所述传代的代数为9代。
5.根据权利要求3所述的长白仔睾丸支持细胞永生系的建立方法,其特征在于,步骤3)中所述细胞生物学检测为生长曲线分析、特异性基因分析、细胞核型分析、特异性蛋白分析、致瘤性分析和ST细胞系对比。
6.权利要求1~5任一项所述的建立方法建立的长白仔睾丸支持细胞永生系。