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专利号: 2015101797966
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-03-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效表达L-谷氨酸氧化酶的方法,其特征在于,所述方法是以表达L-谷氨酸氧化酶的重组大肠杆菌为生产菌株,在发酵罐上进行分批补料培养生产L-谷氨酸氧化酶;所述分批补料培养是指在分批发酵过程中,采用DO-stat补料方式进行补料或者采用指数补料和DO-stat两种补料方式相结合的策略进行补料培养。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述DO-stat补料方式是指当发酵过程的DO突然升高时开始补料,控制DO关联补料,每当DO高于设定的参数值时就进行片刻的补料,通过补料将发酵过程溶氧控制在10-30%;所述DO-stat设定的参数值为20%-30%中的任意一个值。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述指数补料和DO-stat两种补料方式相-1

结合的策略是指在分批发酵过程中,当DO突然上升时开始采用比生长速率0.15-0.45h 进行指数补料,指数补料过程中维持DO不低于20%,当达到发酵罐溶氧限制,补料方式改为DO-stat并控制溶氧不高于设定的参数值,当菌体OD600达到30-60时采用乳糖进行诱导;所述DO-stat设定的参数值为20%-30%中的任意一个值。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述方法具体是:(1)将重组大肠杆菌种子液按照3-6%的接种量接入发酵罐中,控制温度35-40℃,转速300-500rpm,通气量

1-3vvm,补料前控制DO在30%以上;(2)补料培养阶段:当DO突然升高时候开始补料,控制DO关联补料,每当DO高于设定的参数值时就进行片刻的补料;(3)诱导培养阶段:当菌体达到对数生长中后期或者稳定期时采用终浓度为5g/L-15g/L-的乳糖进行诱导;所述DO-stat设定的参数值为20%-30%中的任意一个值。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法具体是:将重组大肠杆菌种子液按照3-6%的接种量接入发酵罐中,控制温度35-40℃,转速300-500rpm,通气量1-3vvm,补料前控制DO在30%以上;(2)指数补料培养阶段:当DO突然上升时开始采用比生长速率-1

0.15-0.45h 进行指数补料,指数补料过程中维持DO高于20%;(3)DO-stat补料阶段:当达到发酵罐溶氧限制,补料方式改为DO-stat并控制溶氧不高于设定的参数值;(3)诱导培养阶段:当菌体OD600达到30-60时,采用终浓度为5g/L-15g/L的乳糖进行诱导;所述DO-stat设定的参数值为20%-30%中的任意一个值。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法具体是:以4%的接种量转接到含发酵罐中,初始发酵条件为转速300rpm、温度37℃、通气量1vvm,当DO突然上升是开始-1采用比生长速率0.25h 进行补料,补料过程中通过调节转速维持DO高于30%,4h后达到发酵罐溶氧限制,补料方式改为DO-stat并控制溶氧不高于30%,当菌体浓度为OD600=40时采用终浓度10g/L的乳糖进行诱导,诱导12h。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重组大肠杆菌为以E.coli BL21,以pET28a表达载体,表达来源于StreptomycesghanaensisATCC14672的L-谷氨酸氧化酶。

8.根据权利要求1-7任一所述方法得到的L-谷氨酸氧化酶或重组大肠杆菌菌体。

9.权利要求8所述L-谷氨酸氧化酶或重组大肠杆菌菌体在转化生产α-酮戊二酸方面的应用。

10.权利要求9所述的应用,其特征在于,是以L-谷氨酸或谷氨酸钠为底物,在pH

7.0-9.0,温度35-42℃下,转化18-24h,催化生产α-酮戊二酸。