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专利号: 2015102529480
申请人: 江汉大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种肝癌细胞特异性的适配子,其特征在于,所述适配子包括:如序列表SEQ ID NO:1所示的H2c适配子、如序列表SEQ ID NO:2所示的H4c适配子和如序列表SEQ ID NO:3所示的H5b适配子中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的适配子,其特征在于,所述适配子的5'端均连接荧光基团Cy5或Cy3,所述适配子的3'端均连接淬灭基团BHQ1或BHQ2。

3.一种制备如权利要求1所述的适配子的方法,其特征在于,所述方法包括:步骤1:合成随机单链寡核酸第一文库和引物;

步骤2:进行正向筛选,所述正向筛选包括:将所述第一文库与靶细胞共同孵育;

步骤3:分离纯化与所述靶细胞结合的核酸,得到第一模板,利用所述引物对所述第一模板进行不对称扩增,得到第二文库;

步骤4:进行反向筛选,所述反向筛选包括:将所述第二文库与反筛细胞共同孵育;

步骤5:分离纯化不与所述反筛细胞结合的核酸,得到第二模板,利用所述引物对所述第二模板进行不对称扩增,得到第三文库;

步骤6:采用所述第三文库重复步骤2、步骤3、步骤4和步骤5共循环十一次,在第十一次循环时,得到第二十四模板,利用所述引物对所述第二十四模板进行对称扩增,得到扩增产物;

步骤7:将所述扩增产物克隆并测序,分离出单个适配子;

步骤8:模拟分析每个所述单个适配子的二级结构,选出具有代表性的所述适配子,随机截取具有代表性的所述适配子的序列,对具有代表性的所述适配子的序列进行标记,测定具有代表性的所述适配子分别与所述靶细胞和所述反筛细胞的结合率,挑选出与所述靶细胞结合率高且与所述反筛细胞结合率低的所述适配子。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述引物包括正向引物和反向引物,所述正向引物如序列表SEQ ID NO:4所示,所述反向引物如序列表SEQ ID NO:5所示。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述孵育的温度为37℃。

6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,随机截取所述适配子的序列的条件为:选取茎-环结构多的位点进行截取。

7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,采用异硫氰酸酯对具有代表性的所述适配子的序列进行标记。

8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,采用流式细胞实验测定具有代表性的所述适配子分别与所述靶细胞和所述反筛细胞的结合率。

9.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述靶细胞包括Huh7.5.1肝癌细胞和HepG2肝癌细胞中的至少一种,所述反筛细胞为L-02正常肝细胞。