欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2015103076505
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种基于金棒核-银卫星组装体对Mucin-1表面增强拉曼信号超灵敏检测的方法,其特征在于:将修饰有Mucin-1适配体Mucin-1 aptamer的金纳米棒,和修饰有与适配体部分互补序列Mucin-1 CS的银纳米粒子,组装得到金棒核-银卫星组装体,当存在待测物Mucin-1时,组装体的结构发生改变引起拉曼信号的变化,进而进行检测;具体步骤如下:(1)检测传感器的构建

a、金纳米棒上修饰适配体Mucin-1 aptamer:采用晶种生长法合成金纳米棒,将其离心浓缩10倍后,以0.5mM pH 7.2的Tris-HNO3缓冲液进行重悬;加入巯基化的适配体Mucin-1 aptamer,使得适配体与金纳米棒的摩尔比为500︰1;室温孵育3h后,加入NaCl溶液至其浓度为20mM,之后每隔1h加一次NaCl,直至NaCl的终浓度为100mM;老化过夜后,离心

3次除去溶液中未反应的适配体,以0.5 mM pH 7.2 的Tris-HNO3 重悬,得到修饰适配体Mucin-1 aptamer金纳米棒溶液,待用;

Mucin-1 aptamer:

5’-SH-AAAAAGCAGT TGATCCTTTG GATACCCTGG T -3’ ;

b、金纳米棒偶联拉曼信标分子:在步骤a制备的修饰适配体Mucin-1 aptamer金纳米棒溶液中,加入信标分子4-氨基苯硫酚4-ATP保持其终浓度为10μM,室温孵育8h;

c、银纳米粒子偶联Mucin-1适配体部分互补序列Mucin-1 CS;

采用硼氢化钠还原硝酸银的方法合成粒径为10nm的银纳米粒子,银纳米粒子离心浓缩2倍后,用1mM pH7.2的Tris-HNO3 重悬,加入巯基化部分互补序列Mucin-1 CS,使得Mucin-1 CS与银纳米粒子的摩尔比为5︰1;室温孵育过夜后,离心去除未反应的Mucin-1 CS,用1mM pH7.2的Tris-HNO3重悬待用;

Mucin-1 CS:5’-SH- AAAAAATCCA AAGGATGTTC TG -3’;

d、金棒核-银卫星结构的组装:取50μL修饰了Mucin-1 aptamer的金纳米棒,与

80μL修饰Mucin-1适配体部分互补序列Mucin-1 CS的银纳米粒子混匀杂交,并加入Mg(NO3)2至其浓度为20 mM进行老化,室温下孵育12 h,得到金棒核-银卫星组装体;

(2)表面增强拉曼光谱检测:建立金棒核-银卫星组装体表面增强拉曼信号与Mucin-1浓度的标准曲线,根据Mucin-1浓度与拉曼信号强度的关系建立两者之间的标准曲线,从而应用拉曼信号对Mucin-1进行检测。

2.根据权利要求1所述基于金棒核-银卫星组装体对Mucin-1表面增强拉曼信号超灵敏检测的方法,其特征在于步骤(2)具体如下:取相同体积的金棒核-银卫星组装体混合液,分别加入不同浓度的目标物Mucin-1,室温孵育8h,由于Mucin-1会竞争的与Mucin-1 aptamer反应,随着Mucin-1浓度的增加,金棒核-银卫星组装体会有不同程度的解散,因此得到不同的拉曼信号强度;在532nm的激发波长下,根据Mucin-1浓度与拉曼信号强度的关系建立两者之间的标准曲线,从而应用拉曼信号对Mucin-1进行检测。