2+
1.一种Pb 含量的测定方法,其特征是包括以下步骤:1.1磁珠的前期处理,取10μL链霉亲和素修饰的磁珠至1mL离心管中,并用100μL pH 8.0的Tris-HCl缓冲溶液清洗两遍;
1.2发卡DNA的预处理,发卡DNA在使用之前在95℃孵化2min,并逐步降至室温备用;
1.3发卡DNA1在磁珠表面的固定,将100μL pH 6.8的磷酸缓冲溶液加入到盛有10μL-5磁珠的1mL离心管中,并加入10μL 1.00×10 M生物素修饰的发卡DNA1链,在37℃下振荡反应30min,得发卡DNA1修饰的磁珠,并用磷酸缓冲溶液洗涤3遍,并分散于100μL的2+ 2+
磷酸缓冲溶液中;再加入含Pb 样品,DNA1的发卡结构被打开,并生成Pb -G四链体的稳定2+
结构,再加入标记探针DNA2链后,在足点域作用下,DNA2与G四链体碱基配对,Pb -G四链2+ 2+ 2+
体结构被破坏,打开G四链体,释放出Pb ,使Pb 再与未反应的发卡DNA1作用,使得Pb循环利用,同时标记探针DNA2留在磁珠上,通过光二极管诱导化学发光过检测化学发光信2+
号,从而实现Pb 含量的测定。
2+
2.根据权利要求1的一种Pb 含量的测定方法,其特征为所述的DNA部分序列为:DNA1:5’-biotin-ATCCGATCGGATACCCGGGTGGGTGGGTGGGTATCCGA-3’;
DNA2:5’-TCGGATACCCACCCACCCACCCG-FITC-3’。