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专利号: 2015103494436
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述方法为:将含葡萄糖异构酶基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体加入缓冲液中,制成菌悬液;向菌悬液中添加硅藻土,搅拌混匀,再加入聚乙烯亚胺,然后加入戊二醛进行交联,0~30℃搅拌交联1~2h后,抽滤,滤饼用蒸馏水洗涤后用轴向挤压机挤压成长条状,室温风干后,粉碎成粒,获得含葡萄糖异构酶细胞的固定化颗粒;所述硅藻土与菌悬液中湿菌体重量比为

0.01~0.1:1。

2.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述葡萄糖异构酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述缓冲液为pH=6.0~7.5、50mM Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液或pH=6.0~7.5、50mM Tris-HCl缓冲液。

4.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述缓冲液体积用量以湿菌体湿重计为5~15mL/g。

5.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述戊二醛以体积浓度25%戊二醛水溶液形式加入,所述戊二醛水溶液体积用量以湿菌体重量计为

0.05~0.3ml/g。

6.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述聚乙烯亚胺以体积浓度10%聚乙烯亚胺水溶液形式加入,所述聚乙烯亚胺水溶液体积用量以湿菌体重量计为0.1~0.7mL/g。

7.如权利要求2所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述重组基因工程菌构建方法为:将SEQ ID NO.1所示葡萄糖异构酶基因与PGEM-T载体连接后导入E.coli JM109中,提取连接质粒并与质粒pET28b(+)-Nit进行双酶切后,连接过夜,将连接产物导入宿主E.coli BL21(DE3)中,获得重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28b(+)-TEGI。

8.如权利要求1所述含葡萄糖异构酶细胞的固定化方法,其特征在于所述湿菌体的制备方法为:(1)将含葡萄糖异构酶基因的重组基因工程菌接种至斜面培养基,37℃培养12h,获得斜面菌体;斜面培养基组成为:10g/L蛋白胨,10g/L氯化钠,5g/L酵母粉,20g/L琼脂,溶剂为去离子水,pH自然;

(2)将斜面菌体接种至种子培养基,37℃,150rpm培养8h,获得种子液;种子培养基组成:10g/L蛋白胨,10g/L氯化钠,5g/L酵母粉,溶剂为去离子水,pH自然;

(3)将种子液以体积浓度2%接种量接种至发酵培养基,37℃、400rpm条件下培养

3.5h,然后加入10g/L诱导剂,30℃,400rpm条件下诱导12h,取发酵液离心,收集湿菌体;

发酵培养基组成:发酵培养基组成:甘油10g/L,蛋白胨20g/L,酵母粉12g/L,NaCl 10g/L,KH2PO41.36g/L,K2HPO42.28g/L,MgSO40.375g/L,(NH4)2SO45g/L,溶剂为去离子水,pH 7.0。