1.一种香菇多糖的提取纯化方法,其特征在于,所述方法包括步骤:
1)将香菇子实体切碎或粉碎;
2)提取:采用碱水提取,过滤得到提取液;
3)脱蛋白:将步骤2)所得提取液的pH调至10.0,加入香菇子实体重量0.05~0.1 %的碱性蛋白酶,于45~60 ℃下搅拌酶解1~5小时,将酶解液的pH值调至6.0~7.0,灭活,得到一次酶解液;向一次酶解液加入香菇子实体重量0.05~0.1 %中性蛋白酶,于40~60 ℃下搅拌酶解1~5小时,灭活,得到脱蛋白的提取液;
4)醇沉得粗多糖:向步骤3)所得脱蛋白的提取液加无水乙醇,至乙醇终浓度为50%-90 %(v/v),进行沉淀,得到粗多糖;
5)向步骤4)所得粗多糖加入重量为香菇子实体干重30倍的水,于搅拌状态下,缓慢加入浓度为10 %(w/v)氢氧化十六烷基三甲胺水溶液,至无沉淀产生,控制加入过程中的pH为
11~12;于4℃下静置至少2小时,离心取出香菇多糖沉淀,用浓度为20-50 %(v/v)醋酸洗涤,得到香菇多糖中间体沉淀;
6)采用醇沉方法,得到精制香菇多糖。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中的提取方法为:加入体积为香菇子实体干重所占体积20倍的浓度为0.5%-2%(w/v)的氢氧化钠水溶液,室温搅拌提取2-3 h,调pH至中性,过滤,得到提取液。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述碱性蛋白酶的酶活不小于40 万U/g,所述中性蛋白酶的酶活不小于 10 万U/g。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤5)中用20 -50 %(v/v)醋酸洗涤的方法为:加入3~4倍粗多糖干样体积的浓度为20 -50 %(v/v)醋酸,搅拌1-2 min,静置20 min后,于5000 rpm下离心10 min,得到香菇多糖中间体沉淀。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤6)中所述醇沉方法为:加入乙醇,至乙醇终浓度为50%-90 %(v/v),进行沉淀,静置2~4小时后离心取沉淀用无水乙醇洗涤,干燥得到精制香菇多糖。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法在步骤5)之后还包括脱色步骤:向步骤5)所得香菇多糖中间体加入碱水复溶,上离子交换树脂收集洗脱液,得脱色液。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,在脱色步骤之后还包括控制多糖分子量步骤:将所得脱色液依次经过微滤、超滤、浓缩,得到浓缩液。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述脱色步骤方法为:将香菇多糖中间体用浓度为4%~10%(w/v)氢氧化钠水溶液复溶,加入量为10~20倍香菇多糖中间体干重,得到香菇多糖溶液;香菇多糖溶液调至pH=6~7,超滤脱去大部分盐后上样于阴离子交换树脂柱,利用纯化水洗脱,收集洗脱液;洗脱液上样于阳离子交换树脂柱,纯化水洗脱,收集洗脱液,得到脱色提取液。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述控制多糖分子量步骤为:脱色提取液用2微米微滤膜过滤,得初滤液;对初滤液用20000Da的中空纤维膜进行超滤;浓缩至3~6倍香菇多糖中间体干重量体积,取出,得到浓缩液。
10.由权利要求1-9任一项所述方法制备得到的香菇多糖,其特征在于,所述香菇多糖为类白色粉末,含量96~102%,旋光度为0~17°,红外光谱无α构型吸收峰,具有活性三螺旋结构,重均分子量为40~80万Da。