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专利号: 2015104321487
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组毕赤酵母发酵生产角蛋白酶的方法,其特征在于,是将重组菌的种子培养液,按接种量12-13%接种到装液量25-30%的3L全自动发酵罐中,以50%氨水和磷酸溶液控制pH 5.5,温度30℃,调节搅拌转速为500rpm,通气量维持在2vvm;当甘油耗尽,开始以指数流加方式流加350mL的含12mL/L PTM1的50g/L的甘油,维持比生长速率在0.18h-1,并逐渐将搅拌转速调节到1000rpm,通气量调节到4vvm;待甘油再次耗尽,继续保持体系中基质匮乏状态1h且DO>60%后,开始流加100%甲醇诱导产酶,以反馈流加的方式维持培养基中的甲醇的体积浓度在1.8%;

所述重组菌为以毕赤酵母SMD1168为宿主,以pPIC9k为载体,表达了角蛋白酶;编码所述角蛋白酶的基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,种子培养液的获得是将重组菌株转接到YPD平板上,挑取单菌落接种到含有100mL的YPD培养基的1L摇瓶中,置于摇床中30℃,

220rpm培养24h作为种子液。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,发酵培养基为BSM培养基:5%磷酸26.7ml/L,K2SO4 18.2g/L,CaSO4 0.93g/L,MgSO4·7H2O 14.9g/L,KOH 4.13g/L,甘油40.0g/L,PTM1 

4.35mL/L。