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专利号: 2015104400328
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组表达转肽酶Sortase A的重组大肠杆菌,其特征在于,将来源于金黄色葡萄球菌的去除N端信号肽的srt基因,以pET22b为表达载体,以E.coli BL21(DE3)为宿主构建得到。

2.权利要求1所述重组大肠杆菌在生产转肽酶Sortase A中的应用。

3.一种应用权利要求1所述重组大肠杆菌高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法,其特征在于,在添加IPTG诱导表达Sortase A的同时添加0.75%的甘氨酸,并在诱导表达6小时后再添加2%的甘氨酸。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,按2%的接种量将培养好的种子接入发酵培养基装液量为10%的摇瓶,37℃、250rpm条件下培养至OD600=0.6之后,添加终浓度为

1mM的IPTG和0.75%的甘氨酸进行诱导表达,于30℃、250rpm培养,并在诱导6h后添加

2%的甘氨酸,总诱导培养时间为48h。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,按10%的接种量将预先培养好的种子接入发酵罐,7L发酵罐中所含发酵培养基为3L,通气量为3vvm,转速为500rpm,37℃培养,在OD600达到0.6后加入终浓度为1mM的IPTG和0.75%的甘氨酸,降温至30℃诱导,并在诱导

6h后添加2%的甘氨酸,总诱导培养时间为48h。

6.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于,发酵培养基每升含有:蛋白胨12g,甘油4g,KH2PO42.31g,K2HPO4.3H2O 16.4g。

7.根据权利要求4或5所述的方法,其特征在于,种子的获得方法为:将重组菌接种到种子培养基中,10mL试管装液3mL,温度为37℃,转速250rpm,培养时间为12-18h。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,种子培养基每升含有:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,NaCl 10g/L。