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专利号: 2015104556815
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-11-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种固定化芽胞漆酶,其特征在于,其以3-氨丙基三乙氧基硅烷氨基化的硅藻土为载体,通过共价结合和/或物理吸附的作用将具漆酶活力的芽胞固定在硅藻土表面或孔隙中,其中所述硅藻土为Celite 545,其中所述具漆酶活力的芽胞由短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)产生,其由以下步骤制备而成:(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;

(2)改性硅藻土的制备:称取2g硅藻土,浸泡于20-100ml有机溶剂中,再往其中添加

1-20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷,充分混匀,再将其置于50-120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2-24h;洗涤,抽滤并收集;

(3)共价连接:将制备好的改性硅藻土按20-100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH 

5-8的缓冲液中;往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分分散;往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞,使其终浓度为1.0-10.0mg/ml,并用超声波振荡处理10-60min;将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床,在4-40℃,50-250r/min条件下处理1-48h;

(4)回收:芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗1-5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。

2.一种制备权利要求1所述固定化芽胞漆酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;

(2)改性硅藻土的制备:称取2g硅藻土,浸泡于20-100ml有机溶剂中,再往其中添加

1-20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷,充分混匀,再将其置于50-120℃水浴回流或摇床上旋转振荡2-24h;洗涤,抽滤并收集;

(3)共价连接:将制备好的改性硅藻土按20-100mg改性硅藻土:1ml缓冲液分散到pH 

5-8的缓冲液中;往上述混合物中添加碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.1-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分分散;往含碳二亚胺盐酸盐的混合液中添加芽胞,使其终浓度为1.0-10.0mg/ml,并用超声波振荡处理10-60min;将经上述处理得到的混合物直接转移至摇床,在4-40℃,50-250r/min条件下处理1-48h;

(4)回收:芽胞与改性硅藻土混合物经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗1-5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。

3.权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述有机溶剂为无水乙醇,体积为

48ml,所述3-氨丙基三乙氧基硅烷添加量为2ml,所述反应温度为70℃,所述旋转振荡时间为12h。

4.权利要求2-3任一所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述改性硅藻土添加量为

50mg/ml,所用缓冲液是浓度为0.05M,pH为7的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液,碳二亚胺盐酸盐的添加量为0.4mg/ml,添加碳二亚胺盐酸盐后超声波处理时间为10min。

5.权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述芽胞添加量为5mg/ml,添加芽胞后超声波处理时间为30min,固定化的条件为室温,200r/min,12h。

6.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶在染料废水的脱色处理中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,向废水中添加介体,所述介体为2,2'-联氮基-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐。

8.根据权利要求6-7任一所述的应用,其特征在于,所述的染料为甲基绿、甲基红或酸性红1中的一种或几种。