1.一种固定化芽胞漆酶,其特征在于,以废弃聚乙烯醇海绵为载体,通过共价结合作用将芽胞漆酶固定在海绵纤维表面,所述芽胞漆酶是指芽胞杆菌属菌株所产的具漆酶活性的芽胞,其具体制备方法包括以下步骤:(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞;
(2)海绵的预处理:将废弃海绵切割成2×2×2mm小块,95%乙醇浸泡过夜,反复洗涤,干燥至恒重;
(3)聚乙烯亚胺涂敷与芽胞固定化:将预处理好的海绵按10-50mg/ml浸于水中,用
0.1-2.0mg/ml聚乙烯亚胺水溶液处理3-12h,然后用去离子水洗涤3次,收集聚乙烯亚胺涂敷好的海绵,自然干燥过夜;
(4)加入芽胞悬液使终浓度为湿重1.0-10.0mg/ml,添加体积浓度为0.4-4%的戊二醛交联剂,并在4-40℃,pH 5.0-9.0缓冲液,50-250r/min条件下固定8-24h;
(5)回收:芽胞与聚乙烯亚胺接枝的海绵经混合固定化处理后,过滤,用缓冲液冲洗1-
5次,分别收集上清液和固定化芽胞,保藏于0-40℃。
2.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,步骤(2)也可以不经乙醇浸泡。
3.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,步骤(3)所述聚乙烯亚胺水溶液终浓度为1mg/ml,处理时间为6h。
4.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,步骤(4)聚乙烯亚胺涂敷的海绵、芽胞以及戊二醛的含量分别为30mg/ml,湿重5mg/ml以及体积浓度2%。
5.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,步骤(4)加入交联剂后,在37℃,
0.1M、pH 7.5柠檬酸磷酸盐缓冲液,200r/min条件下固定12h。
6.权利要求1所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,步骤(4)加入的交联剂也可以是碳二亚胺盐酸盐,其处理方法为,加入碳二亚胺盐酸盐使其终浓度为0.2-2.0mg/ml,并使用超声波振荡5-30min,使其充分散;加入芽胞悬液使终浓度为湿重1.0-10.0mg/ml,再使用超声波处理10-60min,并在4-40℃,pH 5.0-9.0缓冲液,50-250r/min条件下固定8-
24h。
7.权利要求6所述的固定化芽胞漆酶,其特征在于,碳二亚胺盐酸盐的终浓度为0.4mg/ml,前后两次超声波处理的时间分别为10min和30min。