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专利号: 201510477435X
申请人: 常熟理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种确定样品卡那霉素浓度的方法,其特征在于,包括:(1)将能够特异性识别卡那霉素的核酸适配体P1和模板DNA片段P混合,P1的3’端碱基与P的3’端互补结合形成P-P1;所述的模板DNA片段P、核酸适配体P1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示;

(2)待测样品中的卡那霉素与核酸适配体P1结合,使得P1与P分开;

(3)加入外切酶Ⅲ,外切酶Ⅲ作用于体系中的P-P1,将P序列中与下游引物互补端的DNA序列切断,使P不能进行PCR扩增循环,但却不能剪切游离的P,P作为模板在下游引物P2的作用下,进行PCR扩增;所述下游引物P2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;

(4)通过检测Ct值确定卡那霉素的量。

2.根据权利要求1所述的确定样品卡那霉素浓度的方法,其特征在于:所述的卡那霉素的浓度为0-500nM。

3.根据权利要求2所述的确定样品卡那霉素浓度的方法,其特征在于:所述的卡那霉素的浓度为1-100nM。

4.根据权利要求1所述的确定样品卡那霉素浓度的方法,其特征在于:基于下列线性方程,确定所述样品中卡那霉素的浓度:y=5.66+1.99LOG(x),

y为不同卡那霉素浓度下扩增曲线的循环数Ct值,x为相应卡那霉素的浓度。