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专利号: 2015105032925
申请人: 湖北工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.亚硝酸菌的高通量筛选方法,使用的接种影印工具,包括圆盘状、同样大小的底板、中间板和面板,它们通过边缘上均匀分布的四根不锈钢螺丝固定,在四根不锈钢螺丝外套铜螺柱,底板、中间板、面板的中心与一手柄通过螺母固定连接;在中间板和面板上有1448个小孔,有10 1448根平头不锈钉穿过中间板和面板的小孔,且钉头在底板和中间板之间可~上下移动;其特征在于:具体过程包括如下步骤:

(1)平板影印接种菌

取在121℃的温度下灭菌的10cm培养皿放入洁净工作台中紫外线照射30分钟,取黑臭河水倒入清洁的灭菌培养皿内,用所述接种影印工具沾取菌悬液后放置于事先制备好的经灭菌的10cm培养皿上, 用记号笔在接种影印工具定位孔对应的培养皿边缘做定位孔标记,盖上平皿盖25℃倒置培养;

(2)平板影印传代

待菌落明显又尚未黏连融合时,采用无菌操作,用同一接种影印工具的定位孔对准培养皿上的定位孔标记,放下接种影印工具,不锈平头钉上将沾染原平板上对应的菌落,再转印于另一个经灭菌的黑臭河水平板上进行传代,盖上皿盖25℃倒置培养,将原代平板于4℃保藏待用;

(3)亚硝酸菌菌落识别

用直径95mm的玻璃纤维滤膜浸润亚硝氮显色液后,将其紧贴至子代平板表面,记录贴膜10分钟时有红色色斑出现的菌落,在原代平板上挑取相同或相应位置的菌落,采用平板划线法分离纯化亚硝酸菌。

2.根据权利要求1所述的方法,特征在于:采用以铵氮为唯一氮源的培养基,结合接种影印工具接种1次获得原代平板,再传代1次获得子代平板。

3.根据权利要求1所述的方法,特征在于:采用贴膜法使显色剂与子代平板上的菌落接触,在30分钟内观察菌落显色反应直观识别阳性菌落,再从原代平板上挑取相应位置的原代菌落进行划线纯化。