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专利号: 2015105112065
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:包括拉曼探针溶液和硝酸纤维素膜;

所述的拉曼探针溶液包括新城疫抗体、3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯和胶体金溶液,所述的拉曼探针溶液为纳米金、3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯复合物与新城疫抗体偶联溶液。

2.根据权利要求1所述的基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:所述的新城疫抗体为新城疫单克隆抗体或新城疫多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:所述的胶

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体金溶液中纳米金颗粒的直径为20nm,纳米金颗粒的浓度为9×10 颗粒/mL。

4.根据权利要求3所述的基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:所述的纳米金颗粒,通过下述制备方法获得:将1mL的质量分数1%氯金酸溶解于100mL超纯水中,随后加入2mL的质量分数1%柠檬酸钠溶液,并用0.1M碳酸钾将pH调至7,在有冷凝回流装置中50℃-100℃加热20-30分钟,直到颜色变成深紫色;得到纳米颗粒经光子相关光谱

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测量大小为20nm,浓度为9×10 颗粒/mL。

5.根据权利要求1所述的基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:所述的

3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯,通过下述的的制备方法获得:取100mL圆底双口烧瓶,氮气条件下,加入50mL干燥四氢呋喃,加入0.5g的5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)溶解,再加入0.29g的N-羟基丁二酰亚胺,冰浴,加入0.42mL二环己基碳二亚胺,撤去冰浴,室温下,回流搅拌12h;抽滤反应液,取滤液,40℃下旋蒸除去溶剂得到粗产品,使用丙酮重结晶,获得3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯。

6.根据权利要求1所述的基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒,其特征在于:所述的纳米金、3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯复合物与新城疫抗体偶联溶液,通过以下方法制备获得:(1)纳米金与3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯偶联,具体制备步骤为:称1mg的3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯在1.5mL离心管,加入100μL乙

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腈,完全溶解变澄清;取30μL加入1mL的浓度为9×10 颗粒/mL胶体金溶液,涡旋混匀;

室温震荡过夜,获得纳米金与3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯偶联溶液;

(2)纳米金、3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯(DSNB)复合物与新城疫抗体偶联:将步骤(1)中4℃过夜溶液,12000rpm,10min离心,可见深紫色小点在底部;移除上清液,用等体积的超纯水重新悬浮纳米金,再12000rpm,10min离心去除3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯;移除上清液,用1mL超纯水重悬纳米金溶液;取1uL的

1mg/mL新城疫抗体加入1mL的纳米金和DSNB混合液中;涡旋混匀,室温震荡过夜后获得。

7.应用权利要求1~6任一项所述的试剂盒进行新城疫病毒的检测方法,其特征在于:包括以下步骤:

将新城疫病毒滴入硝酸纤维素膜中,室温干燥后,将硝酸纤维素膜浸泡于5%的脱脂奶粉,置于37℃摇床封闭1h;TBST洗膜3次,每次5min;取出硝酸纤维素膜浸泡于拉曼探针溶液,37℃摇床孵育1h,TBST洗膜3次,每次5min;待硝酸纤维素膜干燥后,利用拉曼光谱仪对免疫复合物进行拉曼检测,即可以高特异性的识别待测物的增强的拉曼分子信号,实现新城疫病毒的检测。

8.根据权利要求7所述的新城疫病毒的检测方法,其特征在于:所述的拉曼光谱仪为SmartRaman便携式拉曼光谱仪。

9.根据权利要求7所述的新城疫病毒的检测方法,其特征在于:所述的拉曼光谱仪检-1测条件为:激光波长785nm,激光功率为100mW、积分时间为3s、波数范围是700-2000cm 。