1.一种共表达SAL-2和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组DNA和人乳体细胞总RNA中分别扩增出SAL-2基因序列GI:NC_009875和hLYZ基因序列GI:NM_000239;
所述的SAL-2基因和hLYZ基因的扩增包括:以SAL-F SEQ ID NO:1和SAL-R SEQ ID NO:2为引物,以金黄色葡萄球菌噬菌体基因组DNA为模版,扩增SAL-2基因序列;以LYZ-F SEQ ID NO:3和LYZ-R SEQ ID NO:4为引物,以人乳体细胞总RNA为模版,扩增hLYZ基因序列;以rSAL-F SEQ ID NO:5和rSAL-R SEQ ID NO:6为引物,以金黄色葡萄球菌噬菌体基因组DNA为模版,扩增两端为不同限制性酶切位点的SAL-2基因序列;
2)将获得的目的基因分别克隆到pShuttle-IRES-hrGFP-2穿梭载体中,线性化重组穿梭载体后与骨架载体pAdeasy-1共转染大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在BJ5183内进行同源重组,构建了包含目的基因的重组腺病毒质粒pAd-SAL-LYZ;
3)将重组腺病毒质粒由PacⅠ酶切后,经脂质体介导转染HEK293细胞,包装获得重组腺病毒Ad-SAL-LYZ。
2.如权利要求1所述的共表达SAL-2和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒的构建方法制备的重组腺病毒。
3.如权利要求1所述的共表达SAL-2和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒的构建方法制备的重组腺病毒在防治奶牛乳房炎小鼠动物模型中细菌性疾病生物制品方面的应用。