1.一种通过花药培养获得甜叶菊再生植株的方法,其特征在于:所述的培养方法包括以下技术环节:(1)花蕾采集:采集花粉发育时期为单核靠边的花蕾;
(2)花蕾低温预处理与消毒,包括:
①对采集的花蕾进行低温预处理:将花药装入自封袋后置于4℃冰箱中,进行3d的预处理;
②用洗洁精水清洗干净花蕾表面的污垢后,再用蒸馏水冲洗3~4次,置于超净工作台上,用75%的酒精浸泡20~30s,无菌水冲洗2~3次,再用0.1%HgCl2处理6~8min,无菌水冲洗4~5次,用无菌滤纸吸干多余水分后备用;
(3)愈伤组织诱导培养,包括:
①诱导愈伤组织的培养基为B5+6-BA 1~1.5mg/L+NAA 0.2~0.5mg/L+5.5g/L琼脂+
6%蔗糖;
②将上述处理好的花蕾在超净台下用解剖针剥出花药,将花药接种于愈伤组织诱导培养基上,每瓶接种4~6枚花药;
③接种后黑暗条件下培养10d后再进行光培养,培养温度25±1℃,光照强度1000~
1500Lx,光照时间12h/d,相对湿度60%;
(4)愈伤组织分化培养,包括:
①愈伤组织分化培养基为MS+BA 0.5~1mg/L+NAA 0.1~0.2mg/L+5.5g/L琼脂+6%蔗糖;
②愈伤组织直径为0.5cm,并有出现绿色生长点时转入分化培养基培养形成丛芽;
③培养温度25±1℃,光照强度2000Lx,光照时间12h/d,相对湿度60%;
(5)不定芽生根培养,包括:
①生根培养基为MS+NAA 0.1mg/L+2%蔗糖,当不定芽长至3~4cm时接入生根培养基培养;
②培养温度25±1℃,光照强度2000Lx,光照时间12h/d,相对湿度60%;
(6)再生植株的秧苗锻炼与移栽,包括:①当幼苗生根,苗高1~2cm时打开瓶盖添加10~20mL无菌水,环境温度25℃,相对湿度
85%,光照强度2000Lx,炼苗2~3天;
②锻炼后的试管苗洗净根部琼脂移栽到穴盘中,期间温度控制在25℃,湿度控制在
85%,当苗长至10~15cm时即可移栽大田。