1.一种通过花药培养获得甜叶菊再生植株的方法,其特征在于:所述的培养方法包括以下技术环节:(1)花蕾采集;(2)花蕾低温预处理与消毒;(3)愈伤组织诱导培养;(4)愈伤组织分化培养;(5)不定芽生根培养;(6)再生植株的秧苗锻炼与移栽。
2.根据权利要求1所述的甜叶菊花药培养方法,其特征在于,所述的培养方法具体包括以下步骤:(1)花蕾采集:采集花粉发育时期为单核靠边的花蕾;
(2)花蕾低温预处理与消毒,包括:
① 对采集的花蕾进行低温预处理;
② 用洗洁精水清洗干净花蕾表面的污垢后,再用蒸馏水冲洗3~4次,置于超净工作台上,用75%的酒精浸泡 20~30s,无菌水冲洗2~3次,再用0.1% HgCl2处理 6~8min,无菌水冲洗 4~5次,用无菌滤纸吸干多余水分后备用;
(3)愈伤组织诱导培养,包括:
① 诱导愈伤组织的培养基为B5+6-BA1~1.5mg/L+ NAA 0.2~0.5mg/L+5.5g/L琼脂+6 %蔗糖;
②将上述处理好的花蕾在超净台下用解剖针剥出花药,将花药接种于愈伤组织诱导培养基上,每瓶接种4~6枚花药;
③接种后黑暗条件下培养10d后再进行光培养,培养温度(25±1)℃,光照强度
1000-1500Lx,光照时间12 h/d,相对湿度60%左右;
(4)愈伤组织分化培养,包括:
① 愈伤组织分化培养基为MS+BA0.5~1mg/L+ NAA0.1~0.2 mg/L+5.5g/L琼脂+6%蔗糖;
② 愈伤组织直径约0.5cm,并有出现绿色生长点时转入分化培养基培养形成丛芽;
③培养温度(25±1)℃,光照强度2000Lx,光照时间12 h/d ,相对湿度60%左右;
(5)不定芽生根培养,包括:
① 生根培养基为MS+ NAA0.1 mg/L+2%蔗糖,当不定芽长至3~4cm时接入生根培养基培养;
②培养温度(25±1)℃,光照强度2000Lx,光照时间12 h/d,相对湿度60%左右;
(6)再生植株的秧苗锻炼与移栽,包括:
①当幼苗生根,苗高1~2cm时打开瓶盖添加10-20mL无菌水,环境温度25℃,相对湿度
85%左右,光照强度2000Lx,炼苗2~3天;
② 锻炼后的试管苗洗净根部琼脂移栽到穴盘中,期间温度控制在25℃,湿度控制在
85%左右,当苗长至10~15cm左右时即可移栽大田。