1.如SEQ ID NO.3的编码寄生疫霉ω-3脱饱和酶的重组核酸序列。
2.含有权利要求1所述核酸的表达载体,其特征在于能够表达寄生疫霉的ω3脱饱和酶。
3.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于所述载体是PYES2/NTC-oPpFADS17。
4.根据权利要求3所述的表达载体,其特征在于扩增目的基因的引物为:oPpFADS17F:ctaattgaattcATGGCAACCAAGCAAGCoPpFADS17R:cgattctcgagTTAAGTTGACTTGGTTTTAACAGCG。
5.含有权利要求2或3所述表达载体的重组微生物,其特征在于所述重组微生物能够表达寄生疫霉的ω-3脱饱和酶。
6.根据权利要求5所述的重组微生物,其特征在于所述重组微生物是重组酿酒酵母菌。
7.权利要求6所述的重组酿酒酵母菌的构建方法,包括以下步骤:(1)根据酿酒酵母的密码子使用偏好性,对寄生疫霉的核酸序列进行密码子优化,人工合成如SEQ ID NO.3的优化后的基因序列oPpFADS17,然后与PUC57-simple载体连接得重组质粒PUC57-oPpFADS17,保存在大肠杆菌Top10中;
(2)根据oPpFADS17序列设计引物:
oPpFADS17F:ctaattgaattcATGGCAACCAAGCAAGCoPpFADS17R:cgattctcgagTTAAGTTGACTTGGTTTTAACAGCG以质粒PUC57-oPpFADS17为模板,PCR扩增得到目的基因片段;
(3)用限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切目的基因片段和载体PYES2/NT C,酶切产物用Thermo Scientific GeneJET gel extraction kit试剂盒进行胶回收后,存于-20℃待用;用T4连接酶连接纯化后的目的基因片段oPpFADS17和载体PYES2/NT C,4℃孵育
12h,得到重组表达载体质粒PYES2/NT C-oPpFADS17;
(4)转化酿酒酵母INVSc 1得到重组酿酒酵母菌。
8.根据权利要求7所述的构建方法,其特征在于步骤(2)中PCR扩增的反应条件为:
94℃30s,55℃30s,68℃1.5min,30个循环,68℃10min,并对PCR产物进行纯化,纯化产物用1.0%的琼脂糖凝胶电泳验证。
9.如SEQ ID NO.4的编码寄生疫霉ω-3脱饱和酶的重组氨基酸序列。
10.权利要求7所述的脱饱和酶在多不饱和脂肪酸生物合成中的用途,其特征在于在Δ5,8,11,14 Δ5,8,11,14,17常温下将C20:4 催化为C20:5 ,催化效率达到65%。