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专利号: 2015109312709
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.纳米羟基磷灰石-siRNA复合物,其特征在于所述复合物是由纳米羟基磷灰石和siRNA组成,所述纳米羟基磷灰石为球形,分散性良好,直径为20~50nm。纳米羟基磷灰石表层由聚乙烯亚胺覆盖,Zeta电位为+13.22±0.5mV。

2.根据权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物,其特征在于所述羟基磷灰石表层聚乙烯亚胺分子量为8~120kDa。

3.根据权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物,其特征在于所述的siRNA的靶向基因为ras癌基因家族、sis癌基因家族、myc癌基因家族中的一种。

4.根据权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物,其特征在于所述的siRNA可用FAM、Cy3、Cy5荧光染料中的一种标记。

5.一种如权利要求1所述的纳米羟基磷灰石-siRNA复合物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

1)在15~35℃的反应温度下,将等体积磷酸盐溶液滴加到钙盐溶液中,以200~

400rpm的速度均匀搅拌,利用浓氨水调节pH至10~13,滴加完成后持续搅拌0.5~2h;

2)在上述反应体系中缓慢滴加聚乙二醇溶液,其滴加量为钙盐体积的0.005~0.01倍,滴加完成后持续搅拌3~6h,搅拌速度为200~400rpm,维持反应体系的pH=10~

13;

3)在上述反应体系中缓慢滴加聚乙烯亚胺溶液,其滴加量为钙盐体积的0.005~0.01倍,滴加完成后持续搅拌2~12h,搅拌速度为200~400rpm,维持反应体系的pH=10~

13;

4)反应完成后,8000~15000rpm离心3~5min,分离沉淀,将沉淀分别用去离子水、无水乙醇超声清洗3次,然后将清洗后样品置于37℃~70℃烘箱干燥,得到羟基磷灰石纳米颗粒;

5)将步骤4)得到的羟基磷灰石纳米颗粒紫外灭菌0~24h后以DEPC水重悬、超声,得到羟基磷灰石悬液;

6)将步骤5)得到的羟基磷灰石悬液与siRNA按质量比1:1~20:1进行混合并吹打,

20℃静置5~30min,即得到纳米羟基磷灰石-siRNA复合物。

6.根据权利要求5所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物的制备方法,其特征在于步骤1)中的钙盐溶液为Ca(NO3)2、CaCl2水溶液,优选Ca(NO3)2溶液,终浓度为1~10mmol/L,优选3.0mmol/L;磷酸盐溶液为Na2HPO4、NaH2PO4、(NH4)2HPO4水溶液,优选为(NH4)2HPO4水溶液,终浓度为1~5mmol/L,优选1.8mol/L。

7.根据权利要求5所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物的制备方法,其特征在于步骤2)中的聚乙二醇为PEG-400。

8.根据权利要求5所述的一种纳米羟基磷灰石-siRNA复合物的制备方法,其特征在于步骤3)中加入的聚乙烯亚胺溶液浓度为1~100mg/mL,优选为10mg/mL。