1.赤魟软骨蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）赤魟软骨总蛋白粗提物的制备：称取孔鳐软骨切成小碎块，加入适量蒸馏水，在高速组织捣碎机中匀浆至糊状，将糊状的赤魟软骨浸于4～6倍体积的1.0 mol/L盐酸胍溶液中，该盐酸胍溶液中含0.02 mol/L MES、 0.02 mol/L EDTA及pH值为7～8，于4 ℃下搅拌抽提

36～48 h；提取液在4 ℃下以4000～6000 r/min离心15～25 min，弃残渣收集上清液；上清液继续在4 ℃、10000～12000 r/min离心15～25 min，取上清液用0.22 μm微孔滤膜过滤除去不溶性杂质；将滤液装入分子截留量为8 000的透析袋中，用pH 值为7.6的Tris-HCl缓冲液于4 ℃下透析24～48 h，透析袋内溶液即为赤魟软骨总蛋白粗提物；

2）赤魟软骨丙酮分级沉淀蛋白的制备：取赤魟软骨总蛋白粗提物在冰浴下缓慢加入预冷丙酮至丙酮浓度为30%，在-20 ℃下静置4～6 h后，于4 ℃、10000～12000 r/min高速离心20 min，取上清液，加入预冷丙酮至溶液最终丙酮浓度为60%，获得赤魟软骨60%丙酮沉淀蛋白，冻干，即为60%丙酮分级沉淀蛋白；

3）赤魟软骨丙酮分级沉淀蛋白的酶解：取赤魟软骨60%丙酮分级沉淀蛋白按照料液比

1g:3～5 mL溶于Tris-HCl缓冲液，该缓冲液为0.05mol/L、pH 值为7.5～8.5，按照60%丙酮分级沉淀蛋白重量的2.0～3.0%加入1.9×104 U/g的胰蛋白酶，于40 ℃酶解3～5 h，然后于

90 ℃、10 min灭酶活，酶解液于4 ℃、10000～12000 r/min离心15～25 min，弃残渣收集上清液，得软骨蛋白酶解液；

4）赤魟软骨蛋白抗氧化肽的制备：将上述酶解液采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，冻干，得超滤酶解物；将超滤酶解物次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化，得抗氧化肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤1）中的赤魟为赤魟即Dasyatis akajei。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤4）的离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化的具体过程为：离子交换树脂层析：将上述超滤酶解物溶于双蒸水配成浓度为45～55 mg/mL的溶液，经过DEAE-52离子交换树脂层析柱，用水、0.1 mol/L、0.5 mol/L和1.0 mol/L NaCl溶液进行洗脱，流速为0.6～0.8 mL/min，洗出溶液每3 min收集一管并于280 nm检测，按峰合并试管内溶液，比较各峰的DPPH自由基和羟基自由基的清除活性，选择活性最强组分冻干，即为离子交换层析酶解物；

凝胶柱层析：将上述离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为45～55 mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶Sephadex G-15柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，流速为0.6～0.8 mL/min，洗出溶液每3 min收集一管并于280 nm检测，按峰合并试管内溶液，比较各峰的DPPH自由基和羟基自由基的清除活性，选择活性最强组分冻干，即为凝胶层析酶解物；

反相高效液相色谱纯化：将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成80～100 μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱进行纯化，根据对DPPH自由基和羟基自由基的清除活性得1个高活性抗氧化肽Ile-Glu-Pro-His，ESI-MS测定分子量为494.55 Da。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述反相高效液相色谱的条件为：进样量10～15 μL；色谱柱是规格为250 mm×4.6 mm，5 μm的Zorbax SB- C18；流动相为水-乙腈梯度洗脱，0～32min乙腈浓度，由0匀速升至50%；洗脱速度0.6~1.0 mL/min；紫外检测波长

280 nm。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所制备的抗氧化肽为Ile-Glu-Pro-His，ESI-MS测定分子量为494.55 Da。