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专利号: 2016100356956
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种腈水解酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第190位丝氨酸突变为甘氨酸或精氨酸获得的。

2.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因。

3.一种由权利要求2所述编码基因构建的重组载体。

4.一种由权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。

5.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化扁桃腈制备(R)-扁桃酸中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述的应用为:以含腈水解酶突变体编码基因的重组工程菌经诱导培养后离心获得的湿菌体用pH7.5、0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液悬浮制成的菌悬液为酶源,以外消旋扁桃腈为底物,以pH 4.0-9.0的pH缓冲液为反应介质构成反应体系,在30-70℃、200rpm条件下反应,反应完全后,获得含(R)-扁桃酸的混合液,将混合液分离纯化,获得(R)-扁桃酸;所述湿菌体的用量以反应体系总体积计为1-10g/L,所述底物用量以反应体系总体积计为20~100mmol/L。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含腈水解酶突变体编码基因的重组工程菌接种至含终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、

150rpm/min振荡培养10h;培养液以体积浓度2%接种量接种到新鲜的含有终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、150rpm/min振荡培养至菌体OD600=0.6~0.8,加入终浓度0.5mM的IPTG,28℃、150rpm/min诱导培养10h,于4℃、9000rpm/min离心10min,收集湿菌体。