1.一种检测细胞内CO的荧光探针,其特征是,结构式如下:
其中,R为H、-CH3、-CH2CH3或-COOEt。
2.一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,将对硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯和三氟化硼乙醚,或对硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯衍生物和三氟化硼乙醚反应生成硝基苯基氟硼二吡咯,然后将硝基苯基BODIPY中的硝基还原成氨基,再加入亚硝酸盐和3,5-二甲基苯酚偶氮化反应,最后加入钯盐进行环钯化反应得到目标产物,即检测细胞内CO的荧光探针。
3.如权利要求2所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,步骤如下:
(1)将对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯,或对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯衍生物溶解于溶剂1中,加热回流后冷却,加入溶剂2,加入三氟化硼乙醚升温反后得到5,5-二氟-1,3,7,
9-四甲基-10-(4-硝基苯基)-5H-4λ4,5λ4-二吡咯[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]二氮杂硼,即硝基苯基BODIPY;
(2)将硝基苯基BODIPY和甲酸铵溶于溶剂中,然后加入Pd/C搅拌反应后即得氨基苯基BODIPY;
(3)将氨基苯基BODIPY和浓盐酸溶于溶剂中,加入亚硝酸盐溶液,搅拌后,加入3,5-二甲基苯酚的碱溶液搅拌后得到偶氮BODIPY;
(4)将偶氮BODIPY染料溶解于溶剂中,然后加入PdCl2,室温搅拌过夜后,即得检测细胞内CO的荧光探针。
4.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,所述步骤(1)的具体步骤为:将对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯,或对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯衍生物解于CH2Cl2中,加热回流1-2h,冷却后加入三乙胺、甲苯,待反应10-20分钟后加入三氟化硼乙醚,升温至50-60℃反应2-4小时,旋干,用色谱柱分离,所得固体即硝基苯基BODIPY;
所述的硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯或二甲基吡咯衍生物、三乙胺、甲苯、三氟化硼乙醚及CH2Cl2的用量比为7-10:7-20:3.5-5.5:30-50:3-6:20-50,g:g:mL:mL:mL:mL;色谱柱分离洗脱剂比例为V石油醚:V二氯甲烷=4-6:1。
5.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,所述步骤(2)的具体步骤为:将硝基苯基BODIPY、甲酸铵溶于CH2Cl2,然后加入Pd/C,常温搅拌1-3小时后过滤,将滤液旋干得氨基苯基BODIPY;所述的硝基苯BODIPY、甲酸铵、Pd/C、CH2Cl2的用量比例为:5~10:50~70:1~5:10-30,g:g:g:mL。
6.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,所述步骤(3)的具体步骤为:将氨基苯基BODIPY、浓盐酸溶于DMF中,加入亚硝酸钠水溶液,在0-5℃下搅拌3-4h,然后将其缓慢滴加到3,5-二甲基苯酚的NaOH溶液中,在0-5℃下搅拌4-5h,过滤后的滤渣色谱柱分离,得黄色固体偶氮BODIPY;
所述的氨基苯基BODIPY、浓盐酸、DMF、亚硝酸钠、3,5-二甲基苯酚、NaOH、水的用量比为
1-3:3-5:10-15:3-5:3-5:4-8:20-30,g:mL:mL:g:g:g:mL;色谱柱分离洗脱剂比例为V二氯甲烷:V石油醚=1-3:2。
7.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法,其特征是,所述步骤(4)中的溶剂为CH3OH;所述的偶氮BODIPY、CH3OH、PdCl2的用量比例为5~10:10~30:10~
20,g:mL:g。
8.一种如权利要求1所述的检测细胞内CO的荧光探针在检测细胞内CO中的应用。
9.一种检测细胞内CO的方法,其特征是,步骤为:
(1)将权利要求1所述的检测细胞内CO的荧光探针溶解于生理盐水、缓冲或者培养液中,配制成储备液储存待用;
(2)将步骤(1)中的储备液加入含有细胞组织的适当缓冲液进行测试。
10.一种检测活细胞内CO的方法,其特征是,步骤为:
(1)将含有权利要求1所述的检测细胞内CO的荧光探针的缓冲溶液5-10μM加入培养好的细胞放于培养箱是孵育8-12分钟;
(2)将细胞用生理PBS缓冲液洗去多余的探针,然后进行激光共聚焦显微成像,如果是检测内源性物质,刚是直接进行共聚焦成像,而如果是外加检测的,刚是加了待检测物质后,再次孵育8-12分钟,然后进行成像。