1.一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法,其特征在于:所述方法包括如下:
(1)将浒苔干燥后粉碎,向浒苔干粉中加入60-80%乙醇回流提取1-2小时,干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20-30,回流结束后回收去除乙醇循环使用,烘干得到干燥脱脂的浒苔粉末;
(2)向步骤(1)制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水,其中浒苔质量g与蒸馏水mL体积比为1:25-30,60-70℃萃取温度下480-600 W微波辅助提取2-3 min,提取结束后,进行过滤,将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取,将获得的滤液混合后进行浓缩,加入3-4倍体积95%乙醇,4-10℃静置沉淀8-12小时后,离心收集沉淀,真空冷冻干燥后粉碎,得粗浒苔硫酸多糖;
(3)向步骤(2)所得粗浒苔硫酸多糖中加入蒸馏水,其中硫酸多糖粉末质量mg与蒸馏水mL体积比为1:0.5-1.5,进行搅拌复溶;用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次;
(4)将步骤(3)所得到的溶液,通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱,洗脱液经过非极性吸附剂活性炭去除色素,活性炭使用量g与洗脱液mL按重量体积比1:30-50,于摇床中60-80 r/min下振荡1-2h,6000-8000rpm离心20-30 min,收集上清液;
(5)利用截留分子量8000-14000透析袋,去除小分子及色素;截留液在50-60℃及转速为40-60 r/min条件下旋转蒸发,浓缩至膏状,并进行真空冷冻干燥粉碎后,得到精浒苔硫酸多糖粉末;
(6)将步骤(5)中所得精浒苔硫酸多糖粉末用蒸馏水溶解,质量体积比1:10-25,调节pH为6.5-8.0,加入多聚半乳糖醛酸酶后置于32-40℃,速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解
0.5-1.5 h后取出,沸水加热5-10 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(7)将步骤(6)离心所得上清液调节pH为5.0-6.5,加入α-L-鼠李糖苷酶后置于35-50℃,速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解1-1.2 h后取出,沸水加热5-10 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用;
(8)将步骤(7)离心所得上清液调节pH为4.5-6.0,加入木聚糖酶后置于50-60℃,速度为65-90 r/min水浴摇床中酶解0.5-1 h后取出,沸水加热10-15 min以灭酶活,冷却至室温,离心取上清液备用,至室温,离心取上清液备用;
(9)向步骤(8)中酶解后离心所得上清液加入等体积比95%乙醇,4-10℃静置沉淀1.5-
2.5 h后,沉降除去反应液中蛋白,离心收集上清备用;
(10)向步骤(9)中酶解后离心所得上清液加入体积比1:2-3的95%乙醇沉降除去反应液中未降解多糖,4-10℃静置沉淀8-10 h后,离心收集上清,在37-40℃及转速为60-80 r/min条件下旋转蒸发,浓缩至原体积的1/5-1/4,即为浒苔寡糖粗品溶液;
(11)将步骤(10)中浒苔寡糖粗品溶液,采用截留分子量2000D透析袋处理,收集透析液;
(12)将步骤(11)中透析液采用截留分子量500D透析袋处理,将截留液冷冻干燥,制备得到浒苔活性寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖制备方法,其特征在于:
所述多聚半乳糖醛酸酶、α-L-鼠李糖苷酶、木聚糖酶与步骤(6)中精浒苔硫酸多糖粉末的质量比分别为1:10-15、1:15-25、1:20-40。