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专利号: 2016101268685
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测引物,其特征在于,该引物为P1和P2,序列如SEQ ID NO:1~2所示。

2.一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测试剂盒,其特征在于,含有权利要求1所述引物。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,所述引物的浓度为0.5μM。

4.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还含有PCR反应缓冲液、荧光染料。

5. 根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述荧光染料为LC Green染料。

6.一种鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒的HRM检测方法,其特征在于,从待测样品中提取病毒基因组DNA作为模板DNA,利用权利要求1所述引物对模板DNA进行PCR扩增,对扩增产物进行HRM分析,根据HRM曲线鉴别猪口蹄疫病毒与猪塞内加谷病毒。

7. 根据权利要求6所述的HRM检测方法,其特征在于,当所述基因组DNA为RNA时,其PCR扩增的反应体系为:模板DNA 1 µL,2×1-Step Buffer 12.5µL,PrimeScript 1-step Enzyme Mix 0.5µL,P1 1µL,P2 1µL,LC Green染料 1µL,用双蒸水补足20µL。

8. 根据权利要求6所述的HRM检测方法,其特征在于,当所述基因组DNA为cDNA时,其PCR扩增的反应体系为:模板DNA 2 µL,Premix Ex-Taq 10 µL,P1 1µL,P2 1µL,LC Green染料 1µL,用双蒸水补足20µL。

9. 根据权利要求7所述的HRM检测方法,其特征在于,其PCR的反应程序为:(i)50℃ 30 min;(ii)94℃预变性15min;(iii)94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸45s,步骤(iii)循环35次;(iiii)72℃终延伸10min;80℃到93℃以0.3℃/s的熔解速率进行HRM分析。

10.根据权利要求8所述的HRM检测方法,其特征在于,其PCR的反应程序为:(i)94℃预变性5min(;ii)94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸45s,步骤(ii)循环35次;(iii)72℃终延伸10min;80℃到93℃以0.3℃/s的熔解速率进行HRM分析。