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专利号: 2016101324539
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut,其特征在于所述突变体ReCR-Mut是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中第54位酪氨酸突变为苯丙氨酸获得的。

2.一种权利要求1所述重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

3.一种含权利要求2所述重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut编码基因的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut在生物酶法制备(S)-N-Boc-3-哌啶醇的中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述应用为:以含重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体作为生物催化剂,以N-Boc-3-哌啶酮为底物,以仲辛醇为辅助底物及有机相,以NAD+为辅酶,以pH8.0的缓冲液为反应介质构成两相反应体系,在35℃、300rpm条件下反应,反应完全后将反应液分离纯化,获得(S)-N-Boc-3-哌啶醇;所述反应体系中催化剂用量以湿菌体重量计为240g/L,所述底物终浓度为

300g/L,辅酶终浓度为1.2mM,仲辛醇体积终浓度为60%。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含重组羰基还原酶突变体ReCR-Mut编码基因的工程菌接种至含100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中,

37℃培养12h,获得种子液,将种子液以体积浓度2%的接种量接种至新鲜的含100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中,37℃培养至OD600为0.6~0.8,再加入终浓度为0.3mM的IPTG,

20℃诱导12h,获得诱导培养液,再将诱导培养液于4℃和10000rpm下离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。