1.一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于,包括步骤:步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后,粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡,除蜡后鼓风烘干,挥发乙醚,得到巢脾干燥粉末;
步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后,加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中,木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U,酶解温度为40-60℃,酶解时间0.5-1.5h;
步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤,取上清液;
步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中,再加入10倍以上的蒸馏水后,加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶,重复上述酶解及过滤操作1-2次;将取得的上清液合并,到蜜蜂巢脾多糖提取液A;
步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100℃下进行浓缩1-3h,离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B;
步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液,充分抽提20min后,进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min,取上清液;其中,在制成的所述混合液中,氯仿和正丁醇的体积比为4∶1;对获取的所述上清液再重复本步骤的操作
3次,获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C;
步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇,在0-26℃下醇析4-
24h后,进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min,弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇,得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于,所述将蜜蜂巢脾冷冻后,粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡,除蜡后鼓风烘干,挥发乙醚,得到巢脾干燥粉末,包括:将西方蜜蜂Apis mellifera L.的三年以上的巢脾,-20℃冷冻4h以上,粉 碎后过筛,巢脾粉使用乙醚回流除蜡,除蜡后鼓风烘干,挥发乙醚,得到巢脾干燥粉末。
3.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于,所述将蜜蜂巢脾冷冻后,粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡,除蜡后鼓风烘干,挥发乙醚,得到巢脾干燥粉末,包括:将西方蜜蜂Apis mellifera L.的三年以上的巢脾,-20℃冷冻4h以上,粉碎后过筛,巢脾粉使用乙醚回流除蜡;
采用乙醚回流脱脂后使用80%v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理;
鼓风烘干,得到巢脾干燥粉末。
4.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于,步骤1中的所述过筛具体为:过50-120目筛。
5.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于,所述在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后,加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中,木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U,酶解温度为40-60℃,加热时间0.5-1.5h,包括:在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍的蒸馏水后,加入食品级的木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中,木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加9.6万U,酶解温度为50℃,加热时间1.5h;
所述在进行步骤3操作后所得的滤渣中,再加入10倍以上的蒸馏水后,加入7.2-12万U/
100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作1-2次,包括:在进行步骤3操作后所得的滤渣中,再加入15倍的蒸馏水后,加入9.6万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶,重复上述酶解及过滤操作2次。
6.根据权利要求5所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法,其特征在于, 所述往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇,在0-26℃下醇析4-24h后,进行4000r-
10000r/min的离心操作10-30min,弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇,得到蜜蜂巢脾多糖,包括:往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙醇,在4℃下醇析12h,进行
8000r/min的离心操作20min,弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇,得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
7.一种根据权利要求1-6任一项所述制备方法获得的蜜蜂巢脾多糖提取物,其特征在于,所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖、蛋白质、糖醛酸及单糖,且多糖的含量大于
50%。
8.根据权利要求7所述的蜜蜂巢脾多糖提取物,其特征在于:所述蜜蜂巢脾多糖提取物中,总多糖含量为20-80%。